實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞 2.組織來源:腦靜脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞分離自腦靜脈組織,;與腦動脈相比,腦靜脈管壁較薄,。與身體其他部位的靜脈不同,,腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣,靜脈血的回流依賴高位的勢能,。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為:大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈,;小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢,進(jìn)入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮,,最后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng),。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢,即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞,,大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流,。腦靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細(xì)胞貼壁伸展,,細(xì)胞形態(tài)大小不一,,呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,,核卵圓形,、居中;2周后細(xì)胞匯合,,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,有分枝狀突起,,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏;細(xì)胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀,;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠腦靜脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M103 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%,;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 LTBR 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFRSF10D / TRAILR4 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFRSF1A 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFSF10 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD40 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD40LG 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFSF13 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFSF12 基因全長ORF克隆
食蟹猴 FGF14 基因全長ORF克隆
食蟹猴 LTB 基因全長ORF克隆
小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞15.62-1000 pg/mL 人轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白β鏈3(GNB3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Transcobalamin-2
Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基管 英文名稱:Cary-Blair Transport Medium 產(chǎn)品規(guī)格:20支/包
0.312-20 ng/mL 加壓素(AVP)ELISA試劑盒
0.39-25 ng/mL 人前列腺跨膜上皮抗原1(STEAP1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人磷脂?;级嗑厶翘禺愋粤字珼 (PI-G PLD) ELISA試劑盒
BSSA培養(yǎng)基 英文名稱:BSSA Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
阪崎腸桿菌分離瓊脂(ESIATM) 英文名稱:Enterobacter Sakazakii Isolation Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
31.2-2000 pg/mL 人(Cyt-C)ELISA試劑盒
15.6-1000 U/mL 人粒細(xì)胞過氧化物(EPO)ELISA試劑盒