實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過(guò)大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 DU 145 (前列腺癌細(xì)胞) 別稱DU-145; Du-145; DU 145; DU_145; Duke University 145 種屬人類 年齡(性別)男性,69歲 組織來(lái)源前列腺,;轉(zhuǎn)移灶,;腦癌 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述DU 145細(xì)胞是從一位有3年淋巴細(xì)胞白血病史的前列腺癌患者的腦部轉(zhuǎn)移病灶損害中建株的。DU 145細(xì)胞和從軟瓊脂中分離到的細(xì)胞不具有可檢測(cè)的激素敏感性,,酸性磷酸酶呈弱陽(yáng)性,。對(duì)DU 145細(xì)胞及原始腫瘤細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)分析可見(jiàn)微絨毛,微絲及細(xì)胞橋粒,,有許多線粒體,,發(fā)育良好高爾基體和異質(zhì)溶酶體。DU 145細(xì)胞不表達(dá)前列腺抗體,。 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~30-40小時(shí) 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5% 溫度:37℃ 致瘤性Yes, in nude mice; forms adenocarcinoma (grade II) consistent with prostatic primary. 抗原表達(dá)情況Blood Type O; Rh+ |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)免疫試劑盒*直銷
Toll樣受體6(TLR6)免疫試劑盒*直銷
大鼠CD19分子(CD19)免疫試劑盒*直銷
大鼠二級(jí)淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
綿羊基質(zhì)金屬蛋白1(MMP1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
李斯特菌抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口,、組裝
去乙?;?/span>Sirtuin-5(SIRT5/SIR2L5)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
鴨白介素6(IL-6)免疫試劑盒進(jìn)口,、分裝
TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
17-酮類固醇(17-KS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
DU 145 (前列腺癌細(xì)胞) 50T 流行性肋腺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,,-20℃保存
100 mL F12培養(yǎng)基 Cell Culture Medium -20℃保存
100mL ACES Buffer,0.5M,pH7.4 ACES Buffer,,0.5M,pH7.4 常溫保存
100g DNTriton
2 ug pGADT7-T pGADT7-T 低溫運(yùn)輸,,-20℃保存
麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MacC) Maconkey Agar Medium 250g
1瓶 CFPAC-1細(xì)胞株 CFPAC-1 低溫運(yùn)輸和保存