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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1191 |
商品介紹：
名稱 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞 2.組織來源：脊髓組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠脊髓成纖維細(xì)胞分離自脊髓組織,；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù),；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息,。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面,，上端連接延髓,，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個H形（蝴蝶型）灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成,；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞,。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)（稱為脊神經(jīng)）分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,，也是許多簡單反射活動的低級中樞,。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的脊髓成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。脊髓成纖維細(xì)胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài),；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)；組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠脊髓成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠脊髓成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R167 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
MMP-14 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
Pleiotrophin / PTN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
Pleiotrophin / PTN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
MDK / NEGF2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
E-Cadherin 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
eIF2a 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
大鼠 BMPR1A 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 SIRT3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 SIRT3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
大鼠脊髓成纖維細(xì)胞N-叔丁氧羰基-N'-氧蒽基-L-天門冬酰 98%間二甲苯 99.0%Anti-Phospho-SGK1 (Ser422) /FITC 熒光素標(biāo)記化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
Boc-L-天冬4-環(huán)己酯 99%間二甲苯 CP,95.0% Anti-Phospho-SGK1 (Thr256)/FITC 熒光素標(biāo)記化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
Boc-L-天冬4-甲酯 98%間二甲苯 AR,98%Anti-Shadow/SPRN/FITC 熒光素標(biāo)記新朊蛋白/朊蛋白相關(guān)蛋白/沙杜（Shadoo）蛋白抗體IgG
Boc-L-賴 98%間二甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1mg/ml,溶劑:甲,水質(zhì)分析Anti-Shank1/FITC 熒光素標(biāo)記shank-1抗體IgG
BOC-D-脯 98%鄰二甲苯 Standard for GC,≥99% (GC)Anti-SHBG /FITC 熒光素標(biāo)記性結(jié)合球蛋白抗體IgG
BOC-L-甲酯 99%鄰二甲苯 for HPLC,≥96.0% (GC)Anti-Shh/FITC 熒光素標(biāo)記Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路膜蛋白受體抗體IgG
O-芐基-L- 98%鄰二甲苯 CPShiga-like toxin IIe variant subunit A/FITC 熒光素標(biāo)記抗豬水腫病大腸桿菌志賀樣素Ⅱ型突變體（O139菌株）抗體IgG
BOC-L-羥脯 98%鄰二甲苯 98.0%Anti-SHC/FITC 熒光素標(biāo)記SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgG
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