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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-24 14:45:53瀏覽次數(shù)：320
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X1429 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| DC細(xì)胞 | 1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1429 |
商品介紹：
名稱 DC細(xì)胞 DC細(xì)胞抗腫瘤機制如下： a)DC可以高表達(dá)MHC-Ⅰ類和MHC-Ⅱ類分子，MHC分子與其捕獲加工的腫瘤抗原結(jié)合,，形成肽-MHC分子復(fù)合物,，并遞呈給T細(xì)胞，從而啟動MHC-I類限制性CTL反應(yīng)和MHC-Ⅱ類限制性的CD4+Thl反應(yīng),。同時,，DC還通過其高表達(dá)的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2,、CD40等)提供T細(xì)胞活化所必須的第二信號,，啟動了免疫應(yīng)答,。 b)DC與T細(xì)胞結(jié)合可大量分泌IL-12、IL-18激活T細(xì)胞增殖,，誘導(dǎo)CTL生成,，主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，利于腫瘤清除,；激活穿孔素P顆粒酶B和FasL/Fas介導(dǎo)的途徑增強NK細(xì)胞毒作用,； c)DC分泌趨化因子(Chemotactic Cytokines，CCK)專一趨化初始型T細(xì)胞促進(jìn)T細(xì)胞聚集,，增強了T細(xì)胞的激發(fā),。保持效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位長期存在，可能通過釋放某些抗血管生成物質(zhì)(如IL-12,、IFN-γ)及前血管生成因子而影響腫瘤血管的形成,。上述CCK進(jìn)一步以正反饋旁分泌的方式活化DC,，上調(diào)IL-12及CD80,、CD86的表達(dá)；同時DC也直接向CD8+T細(xì)胞呈遞抗原肽,，在活化的CD4+T細(xì)胞輔助下使CD8+T細(xì)胞活化,，CD4+和CD8+T細(xì)胞還可以進(jìn)一步通過分泌細(xì)胞因子或直接殺傷，增強機體抗腫瘤免疫應(yīng)答,。 DC刺激免疫反應(yīng)有以下特點： 1.樹突狀細(xì)胞（DC)是人體內(nèi)功能*的專職抗原遞呈細(xì)胞,，DC相當(dāng)于信使，將抗原信息傳遞給T細(xì)胞,，并具有活化T細(xì)胞的功能,，很少量就可以激發(fā)強大的T細(xì)胞反應(yīng)。 2.可致敏輔助T細(xì)胞的多種細(xì)胞因子,，顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖,，以激活體內(nèi)靜止?fàn)顟B(tài)的初始型T細(xì)胞（而巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞僅能刺激已活化的或記憶性T細(xì)胞）,。 3.幫助重建腫瘤患者對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能,。機體的免疫系統(tǒng)具有完備的監(jiān)視功能，但腫瘤細(xì)胞對機體的免疫系統(tǒng)有抵抗和抑制作用,，使得免疫細(xì)胞不能識別和殺傷腫瘤細(xì)胞,。在DC疫苗培養(yǎng)中用腫瘤抗原誘導(dǎo)DC使其致敏后，可將其抗原信息傳遞給T細(xì)胞,，使T細(xì)胞重新識別和殺傷腫瘤細(xì)胞,。 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
EPHB1 / EPHT2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SORCS1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
KLK-8 / Kallikrein-8 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD32 / FCGR2B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD64 / FCGR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD32b / FCGR2B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD16-2 / FCGR4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD32a / FCGR2A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DC細(xì)胞分裂周期37樣蛋白1抗體Human CMLC-1(Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit人抗透明帶抗體（aZP）ELISA試劑盒,
羧肽X(M14家族1)抗體Human c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA Kit人球蛋白j鏈（Ig-j）ELISA試劑盒,
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體Human CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1（sMHC-1）ELISA試劑盒,
跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體Human CNTNAP2(Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit小鼠多巴D1受體（D1R）ELISA試劑盒,
分子伴侶CESK1蛋白抗體Human CNTN4(Contactin 4) ELISA Kit大鼠可溶性白介素6受體（sIL-6R）ELISA試劑盒,
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體Human CNX(Calnexin) ELISA Kit大鼠腎損傷分子1（Kim-1）ELISA試劑盒,
CDK5激活結(jié)合蛋白1抗體Human COL11α1(Collagen Type XI Alpha 1) ELISA Kit大鼠生長（GH）ELISA試劑盒,
化表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體Human COL13(Collagen Type XIII) ELISA Kit大鼠抵抗素（Resistin）ELISA試劑盒,
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