詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
MV-4-11 (髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0559 |
商品介紹:
名稱 MV-4-11 (髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞) 種屬人類 年齡(性別)10歲 組織來(lái)源外周血 生長(zhǎng)特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基IMDM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5% 溫度:37℃ 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,,請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液;請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,。 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
VPREB3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PABPC1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SAMHD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CYP17A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PM20D1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LIPH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CRISPLD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RNF128 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SEPP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RELL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MV-4-11 (髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞) 2 ug pNEBRX1-hygro pNEBRX1-hygro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
WPM培養(yǎng)基 WPM Medium 250g
1瓶 TE-1細(xì)胞株 TE-1 低溫運(yùn)輸和保存
培養(yǎng)基(蛋白胨水) Indole Medium 10g
50mg 異硫酸熒光素 FITC 4℃保存
50T 軍團(tuán)菌16S rRNA基因(386bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,,-20℃保存
100mL 沉淀型TMB顯色試劑盒 Precipitated TMB Chromogenic Kit 4℃避光保存