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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠牙齦上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1271 |
商品介紹：
名稱 小鼠牙齦上皮細胞 2.組織來源：牙齦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠牙齦上皮細胞分離自牙齦組織,；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織,，呈粉紅色、有光澤,、質(zhì)堅韌,。牙齦邊緣稱為齦緣，正常呈月芽形,。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝,。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突。也叫齒齦,，通稱牙床,；是指包住齒頸的黏膜組織,，粉紅色,，內(nèi)有很多血管和神經(jīng)。牙齦上皮長期被認(rèn)為是抵御口腔中持續(xù)存在的細菌的被動免疫屏障,，隨著對牙周致病菌的不斷認(rèn)識,，發(fā)現(xiàn)牙齦上皮不僅僅是抵御微生物的物理屏障，上皮細胞還可以分泌抗菌多肽,，參與先天性免疫,。牙齦上皮作為牙周組織的第一道屏障，在抵御牙周炎細菌入侵的過程中發(fā)揮了重要作用,，建立正常牙齦上皮細胞體外培養(yǎng)體系,，將為各種牙齦上皮相關(guān)的研究提供穩(wěn)定的實驗?zāi)Ｐ汀?/span> 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠牙齦上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠牙齦上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M198 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PAH / PH (415 Asn/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VDR / NR1I1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
KIT / c-KIT / CD117 (aa 540-972) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
HER2 / ErbB2 / CD340 (676-1255) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PON3 / Paraoxonase 3 (50 Ser/Asn) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NELL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠牙齦上皮細胞氧化釔 99.99% metals basis亞鈰八水 99.9% metals basisHuman Protein Carbonyl,PC ELISA Kit 人羰基化蛋白
氧化釔 40nm 球形,，99.5%亞鈰八水 99.999% metals basishuman phospho-inhibitory subunit of NF-κB Alpha,pIKB Alpha ELISA kit 人化核因子κB抑制蛋白α（IKKα human ELISA kit）
氧化釔 99.99% metals basis ,50nm環(huán)十二酮 99%Human paxillin,Pax ELISA Kit 人樁蛋白
二氧化鋯 AR,99.0%環(huán)十二碳三烯 98%Human small breast epithelial mucin,SBEM ELISA Kit 人小表皮粘蛋白
二氧化鋯 99.99% metals basis,50nm2-氯乙基苯硫 98%human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12,LOC382344 ELISA kit 人類似60S核糖體蛋白L21
納米氧化鋅 99.9% metals basis,，30±10nm1-苯基-炔 97%human orosomucoid 2,ORM2 ELISA Kit 人類粘蛋白2
納米氧化鋅 99.8% metals basis，90±10nm12-冠-4 98%human MAX dimerization protein 1,mxd1 ELISA Kit 人MAX二聚化蛋白1
納米氧化鋅 99.8% metals basis,，50±10nm環(huán)戊 99.9%,含50ppm BHT 抑制劑human claudin 14,CLDN14 ELISA Kit 人水閘蛋白14
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