詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠牙齦上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1271 |
商品介紹:
名稱 小鼠牙齦上皮細胞 2.組織來源:牙齦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 小鼠牙齦上皮細胞分離自牙齦組織,;牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織,,呈粉紅色、有光澤,、質(zhì)堅韌,。牙齦邊緣稱為齦緣,正常呈月芽形,。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝,。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突。也叫齒齦,,通稱牙床,;是指包住齒頸的黏膜組織,,粉紅色,,內(nèi)有很多血管和神經(jīng)。牙齦上皮長期被認(rèn)為是抵御口腔中持續(xù)存在的細菌的被動免疫屏障,,隨著對牙周致病菌的不斷認(rèn)識,,發(fā)現(xiàn)牙齦上皮不僅僅是抵御微生物的物理屏障,上皮細胞還可以分泌抗菌多肽,,參與先天性免疫,。牙齦上皮作為牙周組織的第一道屏障,在抵御牙周炎細菌入侵的過程中發(fā)揮了重要作用,,建立正常牙齦上皮細胞體外培養(yǎng)體系,,將為各種牙齦上皮相關(guān)的研究提供穩(wěn)定的實驗?zāi)P汀?/span> 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠牙齦上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠牙齦上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M198 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%,;CO2,5% |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PAH / PH (415 Asn/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VDR / NR1I1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
KIT / c-KIT / CD117 (aa 540-972) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
HER2 / ErbB2 / CD340 (676-1255) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PON3 / Paraoxonase 3 (50 Ser/Asn) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NELL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠牙齦上皮細胞氧化釔 99.99% metals basis亞鈰八水 99.9% metals basisHuman Protein Carbonyl,PC ELISA Kit 人羰基化蛋白
氧化釔 40nm 球形,,99.5%亞鈰八水 99.999% metals basishuman phospho-inhibitory subunit of NF-κB Alpha,pIKB Alpha ELISA kit 人化核因子κB抑制蛋白α(IKKα human ELISA kit)
氧化釔 99.99% metals basis ,50nm環(huán)十二酮 99%Human paxillin,Pax ELISA Kit 人樁蛋白
二氧化鋯 AR,99.0%環(huán)十二碳三烯 98%Human small breast epithelial mucin,SBEM ELISA Kit 人小表皮粘蛋白
二氧化鋯 99.99% metals basis,50nm2-氯乙基苯硫 98%human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12,LOC382344 ELISA kit 人類似60S核糖體蛋白L21
納米氧化鋅 99.9% metals basis,,30±10nm1-苯基-炔 97%human orosomucoid 2,ORM2 ELISA Kit 人類粘蛋白2
納米氧化鋅 99.8% metals basis,90±10nm12-冠-4 98%human MAX dimerization protein 1,mxd1 ELISA Kit 人MAX二聚化蛋白1
納米氧化鋅 99.8% metals basis,,50±10nm環(huán)戊 99.9%,含50ppm BHT 抑制劑human claudin 14,CLDN14 ELISA Kit 人水閘蛋白14