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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| NK細(xì)胞 | 1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1431 |
商品介紹：
名稱 NK細(xì)胞 NK細(xì)胞確切的來源還不十分清楚，一般認(rèn)為直接從骨髓中衍生,，其發(fā)育成熟依賴于骨髓的微環(huán)境,。小鼠和人的體外實驗表明，胸腺細(xì)胞在體外IL-2等細(xì)胞因子存在條件下培養(yǎng)也可誘導(dǎo)出NK細(xì)胞,。小鼠脾臟在體內(nèi)IL-3誘導(dǎo)下可促進(jìn)NK細(xì)胞的分化,。NK細(xì)胞主要分布于外周血中，占PBMC5～10%,，淋巴結(jié)和骨髓中也有NK活性,，但水平較外周血低。 由于NK細(xì)胞具有部分T細(xì)胞分化抗原,，如80～90%NK細(xì)胞CD2+,，20～30%NK細(xì)胞CD3+（表達(dá)CD3ζ鏈），30%NK細(xì)胞CD8+（α/α）和75～90%NK細(xì)胞CD38+,，而且NK細(xì)胞具有IL-2中親和性受體,，在IL-2刺激下可發(fā)生增殖反應(yīng)，活化NK細(xì)胞可產(chǎn)生IFN-γ,，因此一般認(rèn)為NK細(xì)胞與T細(xì)胞在發(fā)育上關(guān)系更為密切,。 與T細(xì)胞、B細(xì)胞相比,，NK細(xì)胞表面標(biāo)志的特異性是相對的,。人NK細(xì)胞mIg-，部分NK細(xì)胞CD2,、CD3和CD8陽性,，表達(dá)IL-2受體β鏈(P75、CD122）,，CD11b/CD18陽性,。常用檢測NK細(xì)胞的標(biāo)記有CD16、CD56,、CD57,、CD59、CD11b,、CD94和LAK-1,。 一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子，120kDa,，NK細(xì)胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性,，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。 NK細(xì)胞活化途徑： 1,、通過CD3分子的ζ鏈 NK細(xì)胞不表達(dá)TCR/CD3復(fù)合物,，但部分NK細(xì)胞表達(dá)CD3ζ鏈，當(dāng)用CD16抗體刺激NK細(xì)胞活化時,，ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化,，引起胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高，IP3水平增加,，促進(jìn)細(xì)胞因子合成和ADCC作用,。 2、通過CD2分子 CD2與CD58相互作用或用CD2McAb刺激可活化NK細(xì)胞,，CD3ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化,。 3、自然殺傷細(xì)胞刺激因子 自然殺傷細(xì)胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,，NKSF)對NK細(xì)胞有刺激作用,。 IL-2、IL-12,、IFN-α,、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin，LR)對NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用,，體外培養(yǎng)時加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性,。前列腺素(PG)E1、E2,、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細(xì)胞的活性有抑制作用,。 NK細(xì)胞表面具有IL-2中親和性受體,，IL-2誘導(dǎo)NK的殺傷活性約需18-24小時,。此外，IL-2還可誘導(dǎo)NK細(xì)胞的增殖,，一般在刺激后3～4天開始發(fā)生增殖,，其機(jī)理為IL-2可誘導(dǎo)NK細(xì)胞表達(dá)IL-2Rα鏈，新表達(dá)的α鏈與原先細(xì)胞表面的β鏈和γ鏈結(jié)合形成高親和性受體,，在IL-2存在下刺激NK細(xì)胞發(fā)生增殖,。IL-2誘導(dǎo)NK細(xì)胞的活性機(jī)理尚不清楚，可能與增加細(xì)胞粘附分子的表達(dá),，提高對NK抵抗靶細(xì)胞的殺傷活性有關(guān),，還可能增加NK細(xì)胞胞漿中的顆粒以及絲氨酸酯酶mRNA的表達(dá)，活化和促進(jìn)殺傷介質(zhì)的殺傷作用,。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CD16a / FCGR3A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD28 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD19 / Leu-12 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
COQ7 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL-29 / Interleukin-29 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
恒河猴 ErbB2 / HER2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
恒河猴 ErbB2 / HER2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 ErbB2 / HER2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NK細(xì)胞Saccharomyces cerevisiae血管內(nèi)皮生長因子抗體檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae血漿蛋白檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae促性腺釋放抗體檢測試劑盒
Zygosaccharomyces rouxii補(bǔ)體受體1檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiaeβ-伴大豆球蛋白檢測試劑盒
Kloeckera apiculata抗豬圓環(huán)病抗體檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae多氧化檢測試劑盒
Torulaspora delbrueckii核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白1檢測試劑盒
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