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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠表皮角化細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1193 |
商品介紹：
名稱 小鼠表皮角化細(xì)胞 2.組織來源：皮膚組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層,，由胚胎時(shí)期外胚層形成,，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu),，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成,。從基底層到表面可分為五層，即基底層,、棘層,、顆粒層、透明層和角質(zhì)層,。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分,，在體內(nèi)處于不斷增殖過程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層,，少數(shù)位于棘細(xì)胞層,。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加,，并喪失分裂活性,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠表皮角化細(xì)胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠表皮角化細(xì)胞經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M168 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
CA XII 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CA II 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA II 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TRAILR1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
PTP1B / PTPN1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CA IX 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA IX 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 IL10 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ANXA2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
TMED10 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠表皮角化細(xì)胞PE-CY5標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody紫杉醇33069-62-4品牌
APC標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody10 methoxycamptothecin19685-10-0規(guī)格
Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibodymacranthoidin b136849-88-2品牌
Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody大茴香醛123-11-5說明書
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody毛蕊異黃酮-β-D-葡萄糖20633-67-4價(jià)格
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF8 Antibody鉤吻素甲509-15-9規(guī)格
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody（20）-原人參三醇34080-08-5規(guī)格
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody異52012-29-0規(guī)格
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