化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠胚胎成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1215 |
商品介紹：
名稱 大鼠胚胎成纖維細胞 2.組織來源：胚胎組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠胚胎成纖維細胞分離自胚胎；成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大,，細胞質透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細胞,，能產生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性,，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子，而且可以為ES細胞的培養(yǎng)提供類似于體內的微環(huán)境,，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠胚胎成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠胚胎成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產品貨號CM-R175 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 MEP1A ELISA配對抗體
小鼠 IL18R1 ELISA配對抗體
小鼠 DKK3 ELISA配對抗體
小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 ELISA配對抗體
小鼠 CD34 ELISA配對抗體
小鼠 CD5 ELISA配對抗體
小鼠 Axl Kinase ELISA配對抗體
LAIR2 ELISA配對抗體
ICAM-2 / CD102 ELISA配對抗體
DLL1 ELISA配對抗體
大鼠胚胎成纖維細胞苯妥英鈉 98%氧化鉺 99.99%Anti-KLK9/FITC 熒光素標記激肽釋放9抗體IgG
(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡-3-氧基)三-1-吡咯烷基六氟鹽 氧化鉺 99.9% metals basisAnti-KLK10/FITC 熒光素標記激肽釋放10抗體IgG
7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(二基)膦六氟鹽 98%氟化鉺 99.99% metals basisAnti-KLK14/FITC 熒光素標記激肽釋放14抗體IgG
2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸鹽 98%金屬鉺 99.9% metals basis,粉末,50目Anti-KLRF1/NKp80/FITC 熒光素標記性受體NK-p80抗體IgG
卡特縮合劑 98% 氟化鉺 99.9% metals basisAnti-K-ras/FITC 熒光素標記原癌基因K-ras抗體IgG
2-溴-1-乙基吡四氟酸鹽 98%氯化鉺(III),六水 99.5% metals basisAnti-KT3 tag/FITC 熒光素標記KT3 tag標簽抗體IgG
雙（2-氧代-3-惡唑烷基）酰氯 97%氯化鉺(III) 六水合物 99.995% metals basisAnti-KT3 tag/HRP 辣根過氧化物標記KT3 tag標簽抗體IgG
(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-二吡咯基脲六氟酯 98%溴化鉺(III) 超干, 99.99% REOAnti-KCNA5/FITC 熒光素標記通道混合相關蛋白亞型5抗體IgG
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