冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),, 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 Ana-1 (小鼠巨噬細(xì)胞) 別稱Ana-1; ANA1 組織來(lái)源巨噬細(xì)胞 生長(zhǎng)特性半貼半懸 細(xì)胞形態(tài)巨噬細(xì)胞樣 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5% 溫度:37℃ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過(guò)大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)抗體(IgM)免疫試劑盒進(jìn)口,、組裝
兔β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒進(jìn)口,、分裝
兔子血小板衍生生長(zhǎng)因子AA(PDGF-AA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
甘膽酸(CG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
豬磷脂A2(PLA2G1B)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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牛凝血因子XIIIA鏈(F13A1)免疫試劑盒*直銷
肥大細(xì)胞類胰凝乳蛋白免疫試劑盒*直銷
妊娠特異性蛋白B(PSPB)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雄烯二醇免疫試劑盒進(jìn)口,、分裝
Ana-1 (小鼠巨噬細(xì)胞)2 ug pMXmKate(650) pMXmKate(650) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
NLN培養(yǎng)基 NLN Medium 250g
1瓶 T24細(xì)胞株 T24 低溫運(yùn)輸和保存
利茲不動(dòng)桿菌培養(yǎng)基 Leeds Acinetobacter Medium 250g
1g 石榴紅硫酸鹽 Fast Garnet GBC Salt 室溫避光保存
50T 麩質(zhì)Gluten基因PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,,-20℃保存
250mL Western印跡膜洗膜液