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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠真皮成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0981 |
商品介紹：
名稱 小鼠真皮成纖維細胞 2.組織來源：皮膚組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠真皮成纖維細胞分離自真皮組織,；真皮，位于表皮深層,，向下與皮下組織相連,，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內,。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維,，使皮膚既有彈性，又有韌性,。其由兩層組成——乳頭層與網狀層,。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質,。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現為小的突起,；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態(tài),，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠真皮成纖維細胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠真皮成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產品貨號CM-M086 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3-5代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 CTSQ2 基因全長ORF克隆
大鼠 PRAF2 基因全長ORF克隆
大鼠 TPBPA 基因全長ORF克隆
大鼠 AMDHD1 基因全長ORF克隆
大鼠 SEPP1 基因全長ORF克隆
大鼠 TMEM223 基因全長ORF克隆
大鼠 HBA1 基因全長ORF克隆
大鼠 RAN 基因全長ORF克隆
大鼠 MGAT4A 基因全長ORF克隆
大鼠 CAV1 基因全長ORF克隆
小鼠真皮成纖維細胞0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Defensin-5
93.75-6000 pg/mL ELISA Kit for Human Neutrophil collagenase
含225ml10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯均質袋 英文名稱：10% NaCl Trypticase Soy Broth 產品規(guī)格：10個/包
15.6-1000 pg/mL 人α突觸核蛋白(Alpha-synuclein)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人沉默調節(jié)蛋白5(SIRT5)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-17F
78-5000 pg/mL 人白介素5受體αELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人核因子E2相關因子1(NF-E2-related factor 1)ELISA試劑盒
改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古（mLST-Vm） 英文名稱：Modified lauryl sulfate tryptose vancomycin medium 產品規(guī)格：250g
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