實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 大鼠三叉神經(jīng)元細胞 2.組織來源:三叉神經(jīng)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 大鼠三叉神經(jīng)元細胞分離自三叉神經(jīng)組織,;三叉神經(jīng)為最粗大的混合性腦神經(jīng),,含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維,。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核,纖維組成三叉神經(jīng)運動根,,由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,,位于感覺根下內(nèi)側(cè),最后進入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,,經(jīng)卵圓孔出顱,,隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,,主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺,。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主,這些纖維的細胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),,該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,,為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成,,其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根,,由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦,止于三叉神經(jīng)諸感覺核,,其中傳導(dǎo)痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核,;傳導(dǎo)觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支,,即第1支眼神經(jīng),、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng),。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚,、眼及眶內(nèi)、口腔,、鼻腔,、鼻旁竇的粘膜、牙,、腦膜等,,傳導(dǎo)痛、溫,、觸等多種感覺,。 5.方法簡介: 實驗室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學試劑抑制法篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含B-27 Supplement,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R314 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%,;CO2,5% |
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IFNA13 / Interferon alpha-13 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL1R1 / CD121a 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H3N2 (A/Babol/36/2005) 神經(jīng) (Neuraminidase/NA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 OSMR / IL-31RB 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ULBP2 / N2DL-2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠三叉神經(jīng)元細胞聯(lián)氨 CP,98.0%氯化 分析標準品,,99.98%M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit 小鼠胚胎干系MESPU30
聯(lián)氨 99.99% metals basis氯化 分析標準品,K(99.97%)/Cl(100.00%)NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit 小鼠核因子κB亞基p65親和肽
鹽酸 ACS, 37% fuming, Hg ≤0.0000005%, ≥37% (T)重鉻酸 分析標準品,,99.998%GP- II b III a/CD41+CD61(Mouse plaet membrane glycoprotein II b III a) ELISA Kit 小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa
鹽酸 GR,36-38%重鉻酸標準溶液0.1mol/LFFA(Mouse free fatty acids) ELISA Kit 小鼠游離脂肪酸
鹽酸 用于痕量分析, ≥37% (T)鄰苯二甲酸氫 核磁共振定量標準,,99.998%TSP-1(Mouse thrombospondin 1) ELISA Kit 小鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1
鹽酸 ACS, 37%高錳酸標準溶液1/5KMnO4:0.1011mol/LON(Mouse osteonectin) ELISA Kit 小鼠骨粘連蛋白
鹽酸 電子級,37%標準溶液 1.00mg/mL,基體:甲(劇品)FA(Mouse Folic acid) ELISA Kit 小鼠
鹽酸標準溶液 1.000mol/L(1N)環(huán)唑標準溶液 1.00mg/mlhiston-H2b(Mouse histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2bx