實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),,懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 小鼠海馬神經(jīng)元細胞 2.組織來源:腦海馬體 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 小鼠海馬神經(jīng)元細胞分離自海馬體;海馬體(Hippocampus),,又名海馬回,、海馬區(qū)、大腦海馬,,海馬體主要負責記憶和學習,。海馬神經(jīng)元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成,主要功能是參與近期記憶,、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié),、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一,。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng),,在學習、記憶,、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用,,而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細胞聚集區(qū),具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對獨立分布的特點,,境界相對清晰,,便于取材,因此,,海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究者當做理想的實驗?zāi)P?。海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,其在神經(jīng)生物學,,發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應(yīng)用,。 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠海馬神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠海馬神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M107 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞,;屬于不增殖細胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。

實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 CD302 基因全長ORF克隆
大鼠 CD300LG 基因全長ORF克隆
大鼠 CD300E 基因全長ORF克隆
大鼠 CD300A 基因全長ORF克隆
大鼠 CNTN5 基因全長ORF克隆
大鼠 SLC44A1 基因全長ORF克隆
大鼠 F3 基因全長ORF克隆
大鼠 ACE 基因全長ORF克隆
大鼠 NTRK1 基因全長ORF克隆
大鼠 MFI2 基因全長ORF克隆
小鼠海馬神經(jīng)元細胞0.312-20 ng/mL 人前列腺干細胞抗原(Prostate stem cell antigen)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 腦膜炎奈瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
78-5000 pg/mL 豬鏈球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
李斯特氏菌增菌肉湯(LEB) 英文名稱:Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
TPY肉湯 英文名稱:TPY Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.156-10 nmol/mL 人Myocardin(MYOCD)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Platelet-activating factor
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Major facilitator superfamily domain-containing protein 2A
MRS肉湯 英文名稱:MRS Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human T-box transcription factor TBX3