產(chǎn)品屬性: 小鼠外周血單核細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1255 |
商品介紹:
名稱 小鼠外周血單核細(xì)胞 2.組織來源:外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 小鼠外周血單核細(xì)胞分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,,在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。單核細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞,,并在骨髓中發(fā)育,。當(dāng)它們從骨髓進(jìn)入血液時(shí)仍然是尚未成熟的細(xì)胞。與其他血細(xì)胞比較,,單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶,,并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。單核細(xì)胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,,細(xì)胞體積繼續(xù)增大,,直徑可達(dá)50-80μm,細(xì)胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多,,成為成熟的細(xì)胞,。固定在組織中的單核細(xì)胞稱為組織巨噬細(xì)胞,它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié),、肺泡壁,、骨髓、肝和脾等器官,。激活了的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞能生成并釋放多種細(xì)胞毒,、干擾素和白細(xì)胞介素,,參與機(jī)體防衛(wèi)機(jī)制,還產(chǎn)生一些能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生長的因子,。在炎癥周圍單核細(xì)胞能進(jìn)行細(xì)胞分裂,并包圍異物,。 5.方法簡介: 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血單核細(xì)胞采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血單核細(xì)胞經(jīng)CD14免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M191 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)巨噬細(xì)胞樣 傳代特性不增殖;不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%,;CO2,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NMNAT2 / NMNAT-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
EGFL6 / EGF-L6 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 Protein (aa 1-725) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CARKL / SHPK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠外周血單核細(xì)胞化核苷酸交換因子VAV3抗體Anti-MCU Antibody口腔角質(zhì)生長因子5mL規(guī)格
囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)蛋白A抗體Anti-MCM7 Antibody(原貨號(hào)PB0260)親和層析柱12 mL規(guī)格
癌基因VAV2抗體Anti-MDM2 Antibody鎳柱介質(zhì)10mL規(guī)格
囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白BAnti-MDM4 Antibody抗Ⅲ,,10mg/mL1mL圖片
低密度脂蛋白受體抗體Anti-MDK Antibody銀染清除劑30 次價(jià)格
神經(jīng)視錐蛋白樣1抗體(神經(jīng)鈣蛋白)Anti-MDM2 Antibody親和層析柱50 mL價(jià)格
轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白2抗體Anti-MDC1 Antibody考馬斯亮藍(lán) R-25010g圖片
轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4抗體Anti-MED14 Antibody咪唑25g價(jià)格