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詳細介紹
產(chǎn)品屬性： 小鼠外周血單核細胞
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1255 |
商品介紹：
名稱 小鼠外周血單核細胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠外周血單核細胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞,，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞,，并在骨髓中發(fā)育,。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。與其他血細胞比較,，單核細胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶,，并且具有更強的吞噬作用。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,，細胞體積繼續(xù)增大,，直徑可達50-80μm，細胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多，成為成熟的細胞,。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞,，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結、肺泡壁,、骨髓,、肝和脾等器官。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒,、干擾素和白細胞介素,，參與機體防衛(wèi)機制，還產(chǎn)生一些能促進內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞生長的因子,。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂,，并包圍異物。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠外周血單核細胞采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠外周血單核細胞經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M191 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)巨噬細胞樣 傳代特性不增殖,；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NMNAT2 / NMNAT-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
EGFL6 / EGF-L6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 Protein (aa 1-725) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CARKL / SHPK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠外周血單核細胞化核苷酸交換因子VAV3抗體Anti-MCU Antibody口腔角質生長因子5mL規(guī)格
囊泡相關膜蛋白相關蛋白A抗體Anti-MCM7 Antibody(原貨號PB0260)親和層析柱12 mL規(guī)格
癌基因VAV2抗體Anti-MDM2 Antibody鎳柱介質10mL規(guī)格
囊泡相關膜蛋白相關的蛋白BAnti-MDM4 Antibody抗Ⅲ，10mg/mL1mL圖片
低密度脂蛋白受體抗體Anti-MDK Antibody銀染清除劑30 次價格
神經(jīng)視錐蛋白樣1抗體(神經(jīng)鈣蛋白)Anti-MDM2 Antibody親和層析柱50 mL價格
轉錄輔助因子退變樣蛋白2抗體Anti-MDC1 Antibody考馬斯亮藍 R-25010g圖片
轉錄輔助因子退變樣蛋白4抗體Anti-MED14 Antibody咪唑25g價格
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