冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠腦微血管周細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1329 |
商品介紹:
名稱 大鼠腦微血管周細(xì)胞 2.組織來源:大腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 大鼠腦微血管周細(xì)胞分離自腦微血管,;大腦分左右兩個(gè)半球,,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì),。每一個(gè)半球都有三個(gè)面,即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3),、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積),;半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,,它們大大增加了大腦的表面積,;大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂,、頂枕裂和中央溝,。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質(zhì)組分為額葉,、頂葉、顳葉,、枕葉四大部分,。周細(xì)胞(pericyte)又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞,,是一種包圍全身毛細(xì)血管和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞,可以收縮,。周細(xì)胞嵌入毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中,,通過物理接觸和旁分泌信號(hào)與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊,監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程,。此外,,周細(xì)胞還具有調(diào)控毛細(xì)血管血流量、細(xì)胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,,其多功能性是目前研究的熱點(diǎn)之一,,所以對(duì)血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物,、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料,。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細(xì)血管的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個(gè)基膜,,基膜上有多種細(xì)胞連接,,包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素,、纖連蛋白以及接合素,。它還參與毛細(xì)血管直徑的雙向調(diào)控;毛細(xì)血管受損時(shí),,周細(xì)胞還可增殖,,分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦微血管周細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦微血管周細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R222 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%,;CO2,,5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 IL1R1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 IL6ST / gp130 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 LAMP2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 REG1A / PSPS 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 XEDAR / EDA2R 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠腦微血管周細(xì)胞一氧化氮合成-2(抗原)Anti-C6 Antibody侖氨西林Lenampicillin
蛇巴曲抗原Anti-CA1 Antibody利福霉素BRifamycin B
一氧化氮合成-3(抗原)Anti-CA12 Antibody6-青霉烷酸6- aminopenicillanic acid
神經(jīng)肽 Y(抗原)Anti-CA12 Antibody鹽酸左Levofloxacin hydrochloride
谷受體(抗原)Anti-CA13 Antibody阿米卡星雜質(zhì)AAmikacin?impurity A
神經(jīng)生長(zhǎng)因子-3(抗原)Anti-CA13 Antibody克拉維酸鉀Potassium clavulanate
神經(jīng)生長(zhǎng)因子4/5(抗原)Anti-CA13 Antibody鹽酸加替沙星Gatifloxacin hydrochloride
神經(jīng)生長(zhǎng)因子(抗原)Anti-CA14 Antibody頭孢孟多酯Cefamandole Nafate