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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2025-02-20 07:45:04瀏覽次數(shù)：346
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X0195 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| RKO (結(jié)腸腺癌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0195 |
商品介紹：
名稱 RKO (結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 種屬人類 年齡（性別）不詳 組織來源結(jié)腸癌 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述RKO細(xì)胞是一個低分化的結(jié)腸癌細(xì)胞系,。RKO細(xì)胞含有野生型p53，但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRβ1),。RKO細(xì)胞的p53蛋白的水平高于RKO-E6細(xì)胞,，RKO細(xì)胞是RKO-E6細(xì)胞和RKO-AS45-1細(xì)胞的親本細(xì)胞系。RKO細(xì)胞在裸鼠中成瘤,，且在軟瓊脂中形成集落,。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~21小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice. Yes, in soft agar. 受體表達(dá)情況urokinase receptor (u-PAR) |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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