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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 微血管周細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1195 |
商品介紹：
名稱 微血管周細胞 2.組織來源：微血管組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人微血管周細胞分離自微血管組織,；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞,，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮,。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中,，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程,。此外,，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,，其多功能性是目前研究的熱點之一,，所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料,。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量,。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接,，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素,、纖連蛋白以及接合素,。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控；毛細血管受損時,，周細胞還可增殖,，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。 5.方法簡介： 實驗室分離的人血管周細胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人微血管周細胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H169 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠TGF-beta 3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
SOCS3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
PRDX2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
SCARB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
微血管周細胞2-溴苯肼鹽酸鹽 98%200PSS棕色玻璃瓶,大口,200ML,用于盛放固體,φ62*120SM-MHC(Cardiac myosin heavy chain) 心肌肌凝蛋白多肽
3-溴苯肼鹽酸鹽 98%棕色玻璃瓶,大口,60ML,用于盛放固體,φ44.8*75Alpha-Synuclein 核突觸蛋白（抗原）
4-溴苯肼單鹽酸鹽 99%棕色玻璃瓶,小口,120ml,用于乘裝液體,φ48.6*112.6Alpha-Synuclein 核突觸蛋白（抗原）
2-氯苯肼鹽酸鹽 97%30ZSS棕色玻璃瓶,30ML,用于盛裝液體,φ33.2*79CA15-3 peptide 癌相關(guān)抗原抗原
4-氯苯肼鹽酸鹽 97%500MLZPA棕色玻璃瓶,500ML,用于乘放液體,φ75.6*183Substance P Receptor (Neurokinin receptor1;Tachykinin receptor1) P物質(zhì)受體（抗原）
3-氯苯肼鹽酸鹽 98%L-異酯鹽酸鹽 99%p-Caldesmon(phosphor-Ser789) 化鈣介質(zhì)素抗原
3,4-二肼鹽酸鹽 97%三氟甲磺酸鋇 98%NK-2R peptide 神經(jīng)激肽A受體（多肽抗原）
2-氟苯肼鹽酸鹽 97%Boc-烯基甘 二環(huán)己基銨鹽 98%Calpain 1 鈣蛋白（多肽）x
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