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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 微血管周細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1195 |
商品介紹：
名稱 微血管周細(xì)胞 2.組織來源：微血管組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人微血管周細(xì)胞分離自微血管組織,；周細(xì)胞（pericyte）又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞,，是一種包圍全身毛細(xì)血管和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞，可以收縮,。周細(xì)胞嵌入毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中,，通過物理接觸和旁分泌信號(hào)與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程,。此外,，周細(xì)胞還具有調(diào)控毛細(xì)血管血流量、細(xì)胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,，其多功能性是目前研究的熱點(diǎn)之一,，所以對(duì)血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物,、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料,。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細(xì)血管的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個(gè)基膜,，基膜上有多種細(xì)胞連接,，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素,、纖連蛋白以及接合素,。它還參與毛細(xì)血管直徑的雙向調(diào)控；毛細(xì)血管受損時(shí),，周細(xì)胞還可增殖,，分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人血管周細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人微血管周細(xì)胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H169 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠TGF-beta 3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
SOCS3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
PRDX2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
SCARB2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
微血管周細(xì)胞2-溴苯肼鹽酸鹽 98%200PSS棕色玻璃瓶,大口,200ML,用于盛放固體,φ62*120SM-MHC(Cardiac myosin heavy chain) 心肌肌凝蛋白多肽
3-溴苯肼鹽酸鹽 98%棕色玻璃瓶,大口,60ML,用于盛放固體,φ44.8*75Alpha-Synuclein 核突觸蛋白（抗原）
4-溴苯肼單鹽酸鹽 99%棕色玻璃瓶,小口,120ml,用于乘裝液體,φ48.6*112.6Alpha-Synuclein 核突觸蛋白（抗原）
2-氯苯肼鹽酸鹽 97%30ZSS棕色玻璃瓶,30ML,用于盛裝液體,φ33.2*79CA15-3 peptide 癌相關(guān)抗原抗原
4-氯苯肼鹽酸鹽 97%500MLZPA棕色玻璃瓶,500ML,用于乘放液體,φ75.6*183Substance P Receptor (Neurokinin receptor1;Tachykinin receptor1) P物質(zhì)受體（抗原）
3-氯苯肼鹽酸鹽 98%L-異酯鹽酸鹽 99%p-Caldesmon(phosphor-Ser789) 化鈣介質(zhì)素抗原
3,4-二肼鹽酸鹽 97%三氟甲磺酸鋇 98%NK-2R peptide 神經(jīng)激肽A受體（多肽抗原）
2-氟苯肼鹽酸鹽 97%Boc-烯基甘 二環(huán)己基銨鹽 98%Calpain 1 鈣蛋白（多肽）x
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