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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠脾淋巴細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1217 |
商品介紹：
名稱 大鼠脾淋巴細(xì)胞 2.組織來源：脾臟 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠脾淋巴細(xì)胞分離自脾臟組織,；脾臟是機(jī)體最大的免疫器官,，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心,。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處,，與9－11肋相對，長軸與第10肋一致,。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰,，前方有胃，后方與左腎,、左腎上腺毗鄰,，下端與結(jié)腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官,。淋巴細(xì)胞（lymphocyte）白細(xì)胞的一種,，由淋巴器官產(chǎn)生，機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分,。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異,，可分為中樞淋巴器官（又名初級淋巴器官）和周圍淋巴器官（又名次級淋巴器官）兩類。前者包括胸腺,、腔上囊或其相當(dāng)器官（有人認(rèn)為在哺乳動(dòng)物是骨髓）,。它們無須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細(xì)胞，成熟后將其轉(zhuǎn)送至周圍淋巴器官,。后者包括脾,、淋巴結(jié)等。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖,，繼而發(fā)揮其免疫功能,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾淋巴細(xì)胞采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為1×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)過檢測,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R176 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細(xì)胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
EPOR ELISA配對抗體
Ephrin-A1 / EFNA1 ELISA配對抗體
CEACAM5 / CD66e ELISA配對抗體
CD69 ELISA配對抗體
OSMR / IL-31RB ELISA配對抗體
小鼠 IL6RA / CD126 ELISA配對抗體
小鼠 CD157 / BST1 ELISA配對抗體
HSP27 / HSPB1 ELISA配對抗體
SerpinF2 ELISA配對抗體
小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 ELISA配對抗體
大鼠脾淋巴細(xì)胞Bacillus thuringiensis鸚鵡衣原體IgM檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis鸚鵡衣原體IgA檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis抗II檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis抗X檢測試劑盒
Bacillus thuringiensisβ抑制蛋白2檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis碳水化合物反應(yīng)原件結(jié)合蛋白檢測試劑盒
Bacillus thuringiensisPCNP檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2檢測試劑盒
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