冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱(chēng) BV2 (小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞) 別稱(chēng)BV-2 種屬小鼠 年齡(性別)不詳 組織來(lái)源腦,;膠質(zhì)瘤 生長(zhǎng)特性半貼半懸 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述BV-2細(xì)胞是由E·Blasi建立于1990年;BV-2細(xì)胞由小鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染v-raf/v-myc獲永生化,。BV-2細(xì)胞保留有小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞多種形態(tài),、表征和功能特征,;免疫組化結(jié)果顯示,BV-2細(xì)胞為MAC1,、MAC2陽(yáng)性,;而MAC3、膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白,、半乳糖腦苷脂為陰性,。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5% 溫度:37℃ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ECSIT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PFN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TPD52L3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HIST1H2AG 基因全長(zhǎng)ORF克隆
H2AFJ 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LSMD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PAM16 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EGLN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EIF4EBP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ATP6V1G1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BV2 (小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞)2000U T4 RNA 連接 2(截短型 ) T4 RNA Ligase 2(truncated) -20℃保存
100mL RNase-Free Sodium Chloride Solution(無(wú)RNase的氯化鈉溶液),5M RNase-Free Sodium Chloride Solution,5M 常溫保存
0.1mL 細(xì)胞松弛素B溶液,20mg/mL Cytochalasin B Solution -20℃避光保存
2 ug pPROEX HTb pPROEX HTb 低溫運(yùn)輸,,-20℃保存
衛(wèi)矛醇半固體 20支
2 ug pCAMBIA1305 pCAMBIA1305 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
3%NaClONPG 20支