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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| MMQ (大鼠垂體瘤細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0577 |
商品介紹：
名稱 MMQ (大鼠垂體瘤細(xì)胞) 種屬大鼠 年齡（性別）5日齡 組織來(lái)源腦垂體 生長(zhǎng)特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)圓形細(xì)胞,，聚團(tuán)生長(zhǎng) 背景描述The cells secrete prolactin and express functional dopamine receptors 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基Ham's F-12K＋15% HS＋2.5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~48小時(shí) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5% 溫度：37℃ 致瘤性No, in immunosuppressed mice. Yes, in semisolid medium 受體表達(dá)情況dopamine 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,。 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
LYZL4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LAMA4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
C12orf39 基因全長(zhǎng)ORF克隆
OIT3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LGI4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PATE1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
WSCD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FGFRL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TBL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MMQ (大鼠垂體瘤細(xì)胞)含225ml蒸餾水均質(zhì)袋 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包
78-5000 pg/mL 果糖胺（Fructosamine）ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fibrinogen beta chain
0.156-10 ng/mL 人α1微球蛋白/bikunin蛋白前體(AMBP)ELISA試劑盒
0.125-8 ng/mL ELISA Kit for Human Serpin H1
液體沙氏培養(yǎng)基 英文名稱：Liquid Sabourand Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Glutamate decarboxylase 2
ISP培養(yǎng)基2 英文名稱：ISP Medium 2 產(chǎn)品規(guī)格：250g
1%NaCl 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支
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