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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-13 10:04:13瀏覽次數(shù)：253
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0771 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠胰腺上皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0771 |
商品介紹：
名稱(chēng) 大鼠胰腺上皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：胰腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠胰腺上皮細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉,、胰蛋白酶原,、脂肪酶、淀粉酶等,。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸,，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞,、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素,，降低血糖,；γ細(xì)胞分泌生長(zhǎng)抑素，以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌,；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng),、胰液分泌和膽囊收縮,。胰腺干細(xì)胞在發(fā)育上被認(rèn)為分離自?xún)?nèi)胚層胰腺上皮，在隨后的胰腺發(fā)育過(guò)程中,，胰腺干細(xì)胞分化為胰島細(xì)胞（α,、β、δ,、PP細(xì)胞）,、導(dǎo)管上皮細(xì)胞以及腺泡細(xì)胞。胰腺組織中還存在大量的間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞,，包括成纖維細(xì)胞,、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞以及星形細(xì)胞,，其中以成纖維細(xì)胞占主要部分,。要離體分離培養(yǎng)獲得胰腺上皮細(xì)胞就要排除間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞，尤其是成纖維細(xì)胞,。目前常用的去除成纖維細(xì)胞方法有機(jī)械刮除法,、胰蛋白酶消化以及膠原酶消化法等，胰腺上皮細(xì)胞的病變與急慢性胰腺炎的發(fā)生具有重大意義,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺上皮細(xì)胞采用膠原酶分次消化法并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R021 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
KLKB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ROBO2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SerpinA5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SerpinA4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SerpinA3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SerpinA1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CDH3 / CDHP 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PTP1B / PTPN1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PODN / Podocan 基因全長(zhǎng)ORF克隆
F11 / FXI 基因全長(zhǎng)ORF克隆
大鼠胰腺上皮細(xì)胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human 4F2 cell-surface antigen heavy chain
0.156-10 ng/mL 人熱休克蛋白40(HSP40)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human R-spondin-1
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Promotilin
0.312-20 ng/mL 人氧化亞基1(COX1)ELISA試劑盒
硝酸鹽肉湯 英文名稱(chēng)：Nitrate Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
Voges-Proskauer(V-P)試劑盒 英文名稱(chēng)：Voges-Proskauer(V-P) reagent box 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*4
PBS-Tween20洗液 英文名稱(chēng)：PBS-Tween20 lotion 產(chǎn)品規(guī)格：250g
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Kinase suppressor of Ras 2
CVT瓊脂 英文名稱(chēng)：CVT Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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