化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠嗅上皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1259 |
商品介紹：
名稱 大鼠嗅上皮細(xì)胞 2.組織來源：嗅上皮組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠嗅上皮細(xì)胞分離自嗅上皮組織,；嗅上皮細(xì)胞是鼻腔的嗅區(qū)黏膜的一種特殊的感覺性上皮細(xì)胞,，嗅上皮細(xì)胞為棱形雙極細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞表面為細(xì)長(zhǎng)的嗅毛,，突出于嗅區(qū)黏膜上皮細(xì)胞表面,，而細(xì)胞的另一端為中央突，常匯成多數(shù)細(xì)微的嗅絲,，組成嗅神經(jīng)通向顱內(nèi),。這些細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)，是嗅覺功能的重要組成部分,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅上皮細(xì)胞采用膠原酶-胰蛋白酶聯(lián)合消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng),、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅上皮細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R192 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性屬于高度分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
Optineurin / OPTN 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
Lysozyme 2 / LYZL2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
CASK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
PTPN12 (aa 1-355) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
PTPN2 / PTPT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
MERTK / Mer (aa 578-872) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
DUSP3 / VHR 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠嗅上皮細(xì)胞PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPRY2 Antibody水晶蘭科5945-50-6價(jià)格
Cy3標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody擬人參皂苷F1169884-00-0價(jià)格
Cy5標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPR Antibody酸83-44-3品牌
Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPI1 Antibody斑蝥素56-25-7品牌
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPN Antibody(原貨號(hào)PB0114)葉綠醇150-86-7說明書
PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPRY4 Antibody蓮心堿2586-96-1品牌
APC標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPTLC1 Antibodyanemarsaponin和136565-73-6品牌
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SQSTM1 Antibodyα-當(dāng)歸內(nèi)591-12-8品牌
化工儀器網(wǎng)