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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1333 |
商品介紹：
名稱 淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源：血管組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自淋巴管組織,；淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似,，但管徑較細(xì),，管壁較薄，瓣膜較多且發(fā)達(dá),，外形呈串珠狀,。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種,。它們管位于皮下,，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴,。深淋巴管與深部血管伴行,，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴,。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支,。淋巴管在向心行程中,，通常經(jīng)過一個或多個淋巴結(jié)，從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液,。主要功能是濾過淋巴液,，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫反應(yīng),。當(dāng)局部感染時,，細(xì)菌、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入,，引起局部淋巴結(jié)腫大,。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移,。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮,，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu)，參與維持體液平衡,，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)和機(jī)體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運(yùn)輸,，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明,，LEC還在傷口愈合,、淋巴管水腫和炎癥擴(kuò)散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān),。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液,、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤,；②淋巴管炎；③淋巴結(jié)核,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H225 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 EDAR 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 Interferon alpha-B / IFNA8 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD23 / FCER2 / FCER2A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 TrkB / NTRK2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
兔 SCARB3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 GM-CSF / CSF2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MZB1 / PERP1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
STX8 / Syntaxin 8 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞兔抗抗血清Anti-HTR6 Antibody小鼠微管蛋白聚合促進(jìn)蛋白（TPPP）elisa定量檢測試劑盒
兔抗熒光素抗血清Anti-HTT Antibody小鼠抗環(huán)胍肽抗體（ACCPA）elisa定量檢測試劑盒
兔抗HRP抗血清Anti-HTR6 Antibody小鼠低密度脂蛋白 （LDL） elisa定量檢測試劑盒
兔抗人IgA抗血清Anti-HTRA2 Antibody小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3（TGF-β3）elisa定量檢測試劑盒
兔抗人Kappa鏈抗血清（k-鏈抗血清）Anti-HUNK Antibody小鼠高敏甲狀腺素（u-T4）elisa定量檢測試劑盒
兔抗人IgG（γ-鏈）恒定區(qū)抗血清Anti-HUS1B Antibody小鼠肌酐（Cr）elisa定量檢測試劑盒
牛血清白蛋白抗血清Anti-ICAD Antibody 小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白（β-Cat）elisa定量檢測試劑盒
熒光素Cy7標(biāo)記兔IgG(流式同型對照)Anti-IAPP Antibody小鼠Smad同源物7 （Smad7）elisa定量檢測試劑盒
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