化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠牙髓干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1411 |
商品介紹：
名稱 大鼠牙髓干細(xì)胞 2.組織來(lái)源：牙髓組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠牙髓干細(xì)胞分離自滑膜組織,；牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi),。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似，牙冠部髓腔較大,，稱髓室,，牙根部髓腔較細(xì)小，稱根管,，根尖部有小孔,，稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經(jīng),、血管,，淋巴和結(jié)締組織，還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細(xì)胞,，其作用是造牙本質(zhì),。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機(jī)體抵抗力的差異，出現(xiàn)不同的病理變化,，在臨床上會(huì)表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征,。牙髓充血狀況持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)后，轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥,。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,，MSCs）來(lái)源于胚胎時(shí)期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力,，運(yùn)用 MSCs來(lái)修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓、脂肪,、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織以及羊水、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙髓干細(xì)胞采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙髓干細(xì)胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R315 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 ErbB2 / HER2 / CD340 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
G-CSFR / CD114 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CHODL / CHOndrolectin 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD6 / TP120 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD33 / Siglec-3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD300A 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 Ca10 / Car10 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠牙髓干細(xì)胞Escherichia coliβ位淀粉樣前體蛋白裂解1檢測(cè)試劑盒
Escherichia coli酮戊二酸檢測(cè)試劑盒
Escherichia coliEB病抗體檢測(cè)試劑盒
Escherichia coliα淀粉檢測(cè)試劑盒
Escherichia coli膽囊收縮素;縮膽囊素八肽檢測(cè)試劑盒
Escherichia coli卵清蛋白檢測(cè)試劑盒
Escherichia coli高遷移率族蛋白B1-IgG抗體檢測(cè)試劑盒
Escherichia coli高遷移率族蛋白B1-IgM抗體檢測(cè)試劑盒
化工儀器網(wǎng)