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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| MDA-MB-435 (乳腺癌高轉移細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0287 |
商品介紹：
名稱 MDA-MB-435 (乳腺癌高轉移細胞) 別稱MDA-MB435; MDAMB435; MDA.MB.435; MDA-435; MDA 435; MDA435; MD Anderson-Metastatic Breast-435 年齡（性別）女；48歲 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述MDA-MB-435細胞是于1976年建系,，源自一位48歲患有乳腺癌女性的胸腔積液,。但近來證明MDA-MB-435細胞被M14黑色素瘤細胞污染。 生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~26-38 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，100% 溫度：37℃ |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
血清淀粉樣蛋白P(SAP)免疫試劑盒進口,、分裝
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫試劑盒進口,、分裝
大鼠白介素22(IL-22)免疫試劑盒進口、組裝
瘦素(LEP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒*直銷
腫瘤壞死因子受體相關因子1(TRAF1)免疫試劑盒進口,、分裝
小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒*直銷
小鼠胰α淀粉(AMY2A)免疫試劑盒*直銷
豬凝血因子Ⅶ(FⅦ)免疫試劑盒*直銷
大鼠白介素1β前體(pro-IL1B)免疫試劑盒*直銷
MDA-MB-435 (乳腺癌高轉移細胞) 50T 小腸結腸耶爾森菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,，-20℃保存
l mg Z-VAD-FMK（Caspase Inhibitor） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Glycine Buffer（緩沖液）,0.2M,pH2.5 Glycine Buffer,0.2M,pH2.5 常溫保存
5mL MgCl2溶液，25mM,，PCR級 MgCl2,，PCR Grade -20℃保存
2 ug pLAPSN pLAPSN 低溫運輸，-20℃保存
250mL 消化液(無EDTA) Trypsin Solution -20℃保存
1瓶 MDBK細胞株 MDBK 低溫運輸和保存
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