實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 TOV-112D (上皮性卵巢癌細(xì)胞) 年齡(性別)42歲 組織來源卵巢 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生長培養(yǎng)基42.5% MCDB105+42.5% M199+15% FBS+1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
GUSB 基因全長ORF克隆
ARNT 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
RETN 基因全長ORF克隆
SPRY1 基因全長ORF克隆
SIRT3 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
SMOC2 基因全長ORF克隆
MMP16 基因全長ORF克隆
源ALDH1A3 基因cDNA克隆
CDKL3 基因全長ORF克隆
STXBP2 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
TOV-112D (上皮性卵巢癌細(xì)胞) 0.312-20 ng/mL 人腫瘤壞死因子配體超家族成員13B(TALL1/ BLyS)ELISA試劑盒
亞碲酸鉀血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:Potassium Tellurite Blood Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Caspase-1
Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基管(液體)含拭子 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10ml×20支
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Lysophosphatidic acid receptor 1
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(2015藥典) 英文名稱:Sabouraud Dextrose Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Collagen alpha-1(XXVIII) chain
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Ribosome-binding protein 1
0.156-10 ng/mL 人線粒體睪丸特形丙酮酸脫氫E1亞基α(PDHE1-A type II)ELISA試劑盒
3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human ADM