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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠陰道上皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1283 |
商品介紹：
名稱 大鼠陰道上皮細(xì)胞 2.組織來源：陰道組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠陰道上皮細(xì)胞分離自陰道組織；陰道位于膀胱,、尿道和直腸之間,，是一個(gè)富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過程中具有多種生理功能,，是連接子宮與外陰的通道,，是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路,，也是一個(gè)重要的性交器官,。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層，即黏膜層,、肌層和外膜,，陰道黏膜是最外層，也就是最淺表的那一層,，相當(dāng)于皮膚的最外面層一樣,。陰道上皮呈粉紅色，表面為復(fù)層鱗狀上皮,，但無(wú)角化層,。在正常的月經(jīng)周期中，陰道上皮脫落的上皮細(xì)胞的形態(tài)隨著卵巢內(nèi)分泌的變化而改變,，因此通過陰道脫落上皮的病理檢查便可以初步判斷卵巢的內(nèi)分泌功能狀況,。陰道粘膜是指陰道內(nèi)壁分泌的保持陰道內(nèi)壁表面濕潤(rùn)，保持表面活力的粘液膜層,，因?yàn)槠浔砻娑嗾吵?，故為粘膜。在卵泡期,，陰道粘膜受雌激素作用,，上皮增厚,，表皮?xì)胞角化；陰道上皮細(xì)胞內(nèi)糖原豐富（注：陰道粘膜上皮是復(fù)層扁平上皮又名“復(fù)層鱗狀上皮"）,，在陰道桿菌作用下分解為乳酸,，保持陰道的酸性環(huán)境；排卵后,，受孕激素作用,，陰道粘膜上皮大量脫落，角化現(xiàn)象消失,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠陰道上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠陰道上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R202 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
CDKL2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 SCF / C-kit ligand 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
GAD67 / GAD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TAOK3 / JIK / MAP3K18 (aa 1-411) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
CCL17 / TARC / SCYA17 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TLK1 / PKU-beta 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠陰道上皮細(xì)胞Paenibacillus apiaries漢坦病IgG抗體檢測(cè)試劑盒
Brevibacillus agri包柔氏螺旋體IgM抗體檢測(cè)試劑盒
Brevibacillus formosus包柔氏螺旋體IgG抗體檢測(cè)試劑盒
Brevibacillus reuszeri半胱蛋白12檢測(cè)試劑盒
Clostridium defluviiS100鈣結(jié)合蛋白P檢測(cè)試劑盒
Halorubrum lacusprofundi12羥二十烷四烯酸檢測(cè)試劑盒
Halorubrum distributum沙門氏檢測(cè)試劑盒
Enterococcus faecalis甘油酸變位2檢測(cè)試劑盒
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