實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠嗅球細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1415 |
商品介紹:
名稱(chēng) 大鼠嗅球細(xì)胞 2.組織來(lái)源:嗅球組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 大鼠嗅球細(xì)胞分離自嗅球組織;嗅球是脊椎動(dòng)物前腦結(jié)構(gòu)中參與嗅覺(jué)的部分,,用于感知?dú)馕?。嗅球分為二個(gè)不同的結(jié)構(gòu):主嗅球及輔助嗅球。在大腦額葉來(lái)自許多嗅細(xì)胞的神經(jīng)纖維纏集在一起,,形成線球狀的部分,。在這里,纖維與多個(gè)次級(jí)神經(jīng)元——僧帽細(xì)胞的樹(shù)突相連接,,進(jìn)而由這里伸出神經(jīng)纖維形成嗅囊,,終止于額葉下方。一般認(rèn)為它在嗅味的辨別中具有重要的功能,。對(duì)于大部份的脊椎動(dòng)物而言,,嗅球位在大腦的最前面,不過(guò)人的嗅球位于大腦的內(nèi)部,。嗅球由篩骨的篩板固定且保護(hù)嗅球,,哺乳動(dòng)物的篩板會(huì)分隔嗅球和嗅上皮,而嗅神經(jīng)會(huì)穿過(guò)篩板中的篩孔而連接到嗅球,。嗅球分為二個(gè)不同的結(jié)構(gòu):主嗅球及輔助嗅球,。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅球細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅球細(xì)胞經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R317 換液頻率每2天半量換液1次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣 傳代特性不傳代,,不增值,,存活1-2周 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PTH1R / PTHR1 / PTH1 Receptor 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 AGT / SerpinA8 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 NTRK2 / TrkB 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD83 / HB15 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 FCER2A / CD23 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
雪貂 CD20 / MS4A-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
F9 / FIX / Factor IX 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
FST / Follistatin 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠嗅球細(xì)胞Bacillus sp.酚檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.對(duì)甲酚檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.酮檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.網(wǎng)鈣蛋白3檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.髓磷脂轉(zhuǎn)錄因子1檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.檢查點(diǎn)蛋白激1檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.超敏肌鈣蛋白T檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.沉默調(diào)節(jié)蛋白3檢測(cè)試劑盒