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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 鼻黏膜成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1337 |
商品介紹：
名稱 鼻黏膜成纖維細(xì)胞 2.組織來源：鼻粘膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人鼻黏膜成纖維細(xì)胞分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在人體內(nèi)消化,、呼吸,、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu),，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成,。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜,、胃腸黏膜,、鼻腔黏膜,、氣管黏膜,、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱,。它們的結(jié)構(gòu)也因功能,、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜,，簡稱鼻黏膜,，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨,、骨或骨骼肌,。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H227 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CLM-9 / TREM4 / CD300LG 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BTC / Betacellulin 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Siglec-2 / CD22 (aa 176-687) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 Tie2 / TEK 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD86 / B7-2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TrkA / NTRK1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CREG / CREG1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
鼻黏膜成纖維細(xì)胞人H-rasAnti-Phospho PTPN3 (PTPH1)(Ser459) AntibodyAKT蛋白檢測試劑盒
大鼠α1酸性糖蛋白Anti-Phospho RAD17 (Ser646) AntibodyAP2A2檢測試劑盒
人c-sisAnti-Phospho RAF1 (Ser301) Antibody脂肪炎癥因子檢測試劑盒
小鼠一氧化氮合成Anti-Phospho RAF1 (Ser642) Antibodyapelin 12檢測試劑盒
小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成Anti-Phospho RAPGEF1 (Tyr504) Antibodyapelin 13檢測試劑盒
大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3Anti-Phospho RB1 (Ser780) Antibodyapelin 36檢測試劑盒
人c-junAnti-Phospho RHO (Ser334) AntibodyArgonaut-2蛋白檢測試劑盒
人c-fosAnti-Phospho RPA2 (S33) AntibodyATP檢測試劑盒
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