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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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—— 銷(xiāo)售熱線(xiàn) ——
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-22 09:50:43瀏覽次數(shù)：253
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1103 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1103 |
商品介紹：
名稱(chēng) 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：眼角膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼角膜組織,；角膜位于眼球前壁的一層透明膜,，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形,，從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄,。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛,。為了保持透明,，角膜并沒(méi)有血管，透過(guò)外界空氣,、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層,、前彈力層,、基質(zhì)層、后彈力層,、內(nèi)皮細(xì)胞層,。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用,。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞,，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過(guò)離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分,，維持角膜的半脫水狀態(tài),，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂,，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至*失去透明性,。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無(wú)血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)角膜透明性有重要作用,；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度,，防止水分滲入角膜內(nèi),，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對(duì)脫水狀態(tài)，維持透明性,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H134 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Integrin alpha5 / CD49e 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD62E / E-Selectin 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CD62E / E-Selectin 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
HMGB1 / HMG1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
HMGB1 / HMG1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
PDCD1LG2 / PD-L2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
PDCD1LG2 / PD-L2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
Galectin-1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
NTF3 / NT-3 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
NTF3 / NT-3 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
角膜內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)毒培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Toxin-Producing Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Myeloid differentiation primary response protein MyD88
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Protein-arginine deiminase type-2
LB肉湯 英文名稱(chēng)：LB Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人腫瘤壞死因子超家族成員10A(TNFRSF10A )ELISA試劑盒
3.12-200 nmol/L B6(Vitamin B6)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Signal transducer and activator of transcription 5B
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Protein Wnt-7a
BCG牛乳培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：BCG Milk Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
7.8-500 ng/mL 組織胺（Histamine）ELISA試劑盒
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