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詳細(xì)介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠胰腺星狀細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0751 |
商品介紹：
名稱 大鼠胰腺星狀細(xì)胞 2.組織來源：胰腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠胰腺星狀細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉,、胰蛋白酶原,、脂肪酶、淀粉酶等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞,、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,，升高血糖,；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖,；γ細(xì)胞分泌生長抑素,，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌,；PP細(xì)胞分泌胰多肽,，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮,。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提,。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA）,。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的脂滴可以被油紅O染成紅色,，陽性表達(dá)Desmin,。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA,。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d,，胞漿中仍可見明顯的脂滴,，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失,。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá),。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA,，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA,，而不再表達(dá)Desmin,，說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活,，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型,，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時,，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài),、功能發(fā)生變化,，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠胰腺星狀細(xì)胞采用膠原酶制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠胰腺星狀細(xì)胞經(jīng)α-SMA,、Desmin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R016 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
KNG1 / BDK 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
PAPPA2 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
CD208 基因全長ORF克隆
LBP 基因全長ORF克隆
RPGR 轉(zhuǎn)錄變體A 基因全長ORF克隆
Semaphorin 3E 基因全長ORF克隆
SPG3A 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
SPG21 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
SSSCA1 基因全長ORF克隆
FANCL 基因全長ORF克隆
大鼠胰腺星狀細(xì)胞0.156-10 ng/mL 人腸血管活性肽受體2 ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Type III iodothyronine deiodinase
0.156-10 ng/mL 人生長停滯特異性蛋白6(GAS-6)ELISA試劑盒
麥康凱瓊脂（含結(jié)晶紫） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 2
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Very low-density lipoprotein receptor
豬膽粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
78-5000 pg/mL 人卵固蛋白同族物2(Ovostatin homolog 2)ELISA試劑盒
BBL瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：BBL Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
腸道菌增菌肉湯（EE） 英文名稱：Enterobacteria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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