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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠小腸平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0853 |
商品介紹：
名稱 小鼠小腸平滑肌細胞 2.組織來源：小腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠小腸平滑肌細胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通,，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門,，下接盲腸，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分,。小腸內(nèi)消化是至關重要的，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后,，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜,、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞,，粘膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切；構(gòu)成腸腺的細胞有柱狀細胞,、杯狀細胞,、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內(nèi)分泌細胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似,，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主,。平滑肌細胞的收縮是負責腸蠕動的動力，促使食物向下運動,。小腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層,、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤,，是小腸結(jié)締組織惡性腫瘤中最常見的一種。因此,，體外小腸平滑肌細胞的培養(yǎng)對研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎和前提,。此外，體外培養(yǎng)細胞,，由于影響因素較為單一,，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉(zhuǎn)導機制的基礎。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠小腸平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠小腸平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M043 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 CD93 基因全長ORF克隆
小鼠 CD96 基因全長ORF克隆
小鼠 CD84 基因全長ORF克隆
小鼠 LIF 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
小鼠 LIF 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆
小鼠 CD79B 基因全長ORF克隆
小鼠 PARP1 基因全長ORF克隆
小鼠 CDH2 基因全長ORF克隆
小鼠 CD97 基因全長ORF克隆
小鼠 LTF 基因全長ORF克隆
小鼠小腸平滑肌細胞醇麥康凱瓊脂添加劑 英文名稱：Sorbitol MacConkey Agar Additives 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Multiple coagulation factor deficiency protein 2
0.312-20 ng/mL 人硫辛酰胺?；D(zhuǎn)移alpha支鏈-keto酸脫氫復合體,線粒體ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL 人腫瘤壞死因子受體超家族成員9 (TNFRSF9)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Tryptophan 5-hydroxylase 2
0.156-10 ng/mL 人/富有剪接因子3(SRSF3)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Growth/differentiation factor 2
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Probetacellulin
6.25-400 ng/mL ELISA Kit for Mouse Tumor rejection antigen P815A
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