化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠羊膜上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1339 |
商品介紹：
名稱 大鼠羊膜上皮細胞 2.組織來源：胎盤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠羊膜上皮細胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯(lián)合長成的母子間交換物質的過渡性器官,，由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成,。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結合,，以達到母子間物質的交換,，這樣的結構稱假胎盤。羊膜是胎盤的最內層,，與眼結膜組織結構相似,，含有眼表上皮細胞，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質,，其光滑,，無血管、神經(jīng)及淋巴,，具有一定的彈性,；在電鏡下，其分為五層：上皮層,、基底膜,、致密層、纖維母細胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質層含有大量不同的膠元,，主要為Ⅰ、Ⅲ,、Ⅳ,、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質細胞組成，均具有多分化潛能,，可轉化為神經(jīng)元,，且還有合成、釋放生物活性物質和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠羊膜上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠羊膜上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R227 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD73 / NT5E 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD10 / Neprilysin / MME 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 M-CSF / CSF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TrkA / NTRK1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 ICAM-2 / CD102 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LIF 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PSGL-1 / CD162 / SELPLG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD44 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠羊膜上皮細胞二氫黃酮甙 97%2-(二叔丁基膦)聯(lián)苯 97%(LDH)ELISA Kit 大鼠乳酸脫氫
二氫黃酮甙 分析標準品2-(二叔丁基膦)聯(lián)苯 AR,97.0%(MAG Ab)ELISA Kit 大鼠抗髓鞘相關糖蛋白抗體
柚皮苷 95%4,7-二苯基-1,10-菲啰啉 99%(CTX- I )ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原C端肽
槲皮素,二水 97%N,N'-二苯基聯(lián)苯 98%(pIKB Alpha)ELISA Kit 大鼠化核因子κB抑制蛋白α
槲皮素 分析標準品,，≥98.5%二氫尿嘧 99%(NF-κB)ELISA Kit 大鼠核因子κB
L-鼠李糖,，一水 99%L-2,4-二丁酸 98+%(DC-SIGN/CD209)ELISA Kit 大鼠樹突狀表面特異性C型凝集素-間黏附分子3結合非整合素分子
曲克蘆丁 97%2,6-二氯-3-(三氟甲基)吡 98%(P I NP)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽
銻粉 99.5% metals basis1,3-二氯四甲基二硅氧烷 97%(ADAM9)ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白9
化工儀器網(wǎng)