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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-13 09:37:59瀏覽次數(shù)：271
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0753 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 乳腺上皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0753 |
商品介紹：
名稱 乳腺上皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：乳腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人乳腺上皮細(xì)胞分離自乳腺組織,；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺,，主要由腺上皮細(xì)胞組成，并具有特殊的泌乳功能,。在妊娠期,，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡；近年來(lái)的許多研究都表明乳腺癌,、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞（MEC）有密切聯(lián)系,，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開(kāi)展的關(guān)鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織,，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成,，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長(zhǎng)因子共同調(diào)控,，其中乳腺表達(dá)的生長(zhǎng)因子對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的增殖,、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響,。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織,，為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞，呈多角形,、圓形以及短梭形,；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H017 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
Tie1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
THBS1 / Thrombospondin-1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
IL17Rd 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CST5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TPSB2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CPA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CA III 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CCL18 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CPB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CA5-A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
乳腺上皮細(xì)胞0.625-40 ng/mL 人脫羥(ODC)ELISA試劑盒
匹克氏肉湯基礎(chǔ)A 英文名稱：Pick’s Broth BaseA 產(chǎn)品規(guī)格：100g
0.312-20 ng/mL 人類胰島素生長(zhǎng)因子1受體(Insulin-like growth factor 1 receptor)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人NF-κ-B基本調(diào)節(jié)劑( NEMO)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 高致病性豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Profilin-2
78-5000 pg/mL 人鈣蛋白2催化亞基(Calpain-2 catalytic subunit)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人蛋白O-甘露糖基轉(zhuǎn)移1(POMT1)ELISA試劑盒
膽硫乳瓊脂（DHL） 英文名稱：Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Low-density lipoprotein receptor-related protein 4
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