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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1105 |
商品介紹：
名稱 大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast）,，是一群具有游走特性,，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型,，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu),，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示,，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病,、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用,，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路,，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點(diǎn)。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞采用采集外周血,、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R134 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代,；不建議多次傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大??；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
Dectin-1 / CLEC7A 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
Dectin-1 / CLEC7A 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
FGF7 / KGF 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
FGF7 / KGF 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD209 / DC-SIGN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CD209 / DC-SIGN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CNTN3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
Dkk1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
Dkk1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
C2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞0.78-50 umol/L E（Vitamin E）ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Histone acetyltransferase KAT8
0.156-10 ng/mL 人蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子SWEET1(SWEET1)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Obestatin
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Iduronate 2-sulfatase
0.156-10 ng/mL 人酐Ⅸ(Carbonic anhydrase 9)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ras GTPase-activating-like protein IQGAP1
0.312-20 ng/mL 人細(xì)胞凋亡調(diào)整器BAX（Apoptosis regulator BAX）ELISA試劑盒
沙門,、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基（SS） 英文名稱：Salmonella-Shigella 產(chǎn)品規(guī)格：250g
鹽緩沖液（pH7.2） 英文名稱：PBS broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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