實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 Hep-G2/2.2.15 (肝癌細(xì)胞) 別稱HEP-G2/2.2.15; Hep-G2/2215; HepG2-2.2.15; HepG2 2.2.15; HepG2.2.15; HepG2(2.2.15); 2.2.15 年齡(性別)男,;15歲 組織來源肝癌細(xì)胞 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生物安全等級2 生長培養(yǎng)基MEM+10% FBS+380ug/ml G418+1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5% 溫度:37℃ |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
FAIM3 基因全長ORF克隆
LAMP2 基因全長ORF克隆
SHISA3 基因全長ORF克隆
IGFL2 基因全長ORF克隆
OLFM3 基因全長ORF克隆
CRTAC1 基因全長ORF克隆
ADAMTSL1 基因全長ORF克隆
LILRA3 基因全長ORF克隆
CPA6 基因全長ORF克隆
HYAL1 基因全長ORF克隆
Hep-G2/2.2.15 (肝癌細(xì)胞)EC-MUG培養(yǎng)基(100g) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:100g
1.56-100 U/mL 人丙酮酸激M2型同工(M2-PK)ELISA試劑盒
麥康凱肌醇阿東醇羧卞青瓊脂(MZAC) 英文名稱:MZAC Agar 產(chǎn)品規(guī)格:100g
0.312-20 ng/mL 人溶體保護(hù)蛋白(Lysosomal protective protein)ELISA試劑盒
氨基酸脫羧對照 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支
0.156-10 ng/mL 人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒
0.1%蛋白胨水 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:500ml*20瓶
0.156-10 ng/mL 肽(GSH)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL 人成纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Creatinine