化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| MDA-MB-361 (乳腺癌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0541 |
商品介紹：
名稱 MDA-MB-361 (乳腺癌細(xì)胞) 別稱MDA-MB 361; MDA MB 361; MDA-MB361; MDAMB361; MDA-361; MDA361; MD Anderson-Metastatic Breast-361 年齡（性別）40歲 組織來(lái)源乳腺腺癌,；源自轉(zhuǎn)移部位：腦 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生長(zhǎng)培養(yǎng)基Leibovitz's L-15＋20% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，100% 溫度：37℃ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PLXNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PLAC9 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HMSD 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SEZ6L2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ROR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EEF2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PCDHB11 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NFATC1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RNF20 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MDA-MB-361 (乳腺癌細(xì)胞)2 ug pcDNA3-mRFP pcDNA3-mRFP 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存
改良察氏液體培養(yǎng)基 Modified Czapek Dox Broth Medium 250g
100mg 肌球蛋白 Myoglobin -20℃保存
50T 牛皰疹病毒3型PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存
5 mg Di-8-ANEPPS Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH9.0 CAPSO Buffer,0.2M,pH9.0 常溫保存
30mL 天凈沙核酸濃縮劑 Nucleic Acid Concentration Solution 4℃保存
化工儀器網(wǎng)