化工儀器網
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 氣管上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0715 |
商品介紹：
名稱 氣管上皮細胞 2.組織來源：氣管 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人氣管上皮細胞分離自氣管組織,；氣管（Trachea）,，呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀,。上端平第六頸椎下緣,，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四,、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處,，分左、右主支氣管,，分叉處稱為氣管杈,。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構成，有彈性,，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán),，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來,，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接,，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜,，表面覆蓋纖毛上皮,，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出,，以凈化吸入的氣體,。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體,、炎癥介質作用的靶細胞,，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應,。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細胞因與體內組織在形態(tài)結構和功能活動上存在很大的相似性,，因此，在基礎及臨床研究中極為重要。 5.方法簡介： 實驗室分離的人氣管上皮細胞采用鏈霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法結合差速貼壁法,，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的人氣管上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產品貨號CM-H008 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
AKT1 基因全長ORF克隆
EphB2 基因全長ORF克隆
MICB 基因全長ORF克隆
SEMA3A 基因全長ORF克隆
DAPK3 基因全長ORF克隆
sFRP-2 基因全長ORF克隆
HTR4 基因全長ORF克隆
CD36 / SCARB3 基因全長ORF克隆
XBP1 基因全長ORF克隆
MMP-14 基因全長ORF克隆
氣管上皮細胞連四硫酸鹽培養(yǎng)基 英文名稱：Tetrathionate Medium 產品規(guī)格：250g
含90ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質袋 英文名稱：Buffered Peptone Water 產品規(guī)格：90ml/袋*10
white培養(yǎng)基 英文名稱：White Medium 產品規(guī)格：250g
菌種和底層瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：Medium I(foe Seed and Basal Layer) 產品規(guī)格：250g
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Adenosine deaminase domain-containing protein 1
醇-雙岐桿菌鑒定 英文名稱： 產品規(guī)格：20支
15.6-1000 pg/mL 人血小板源生長因子D(PDGF-D)ELISA試劑盒
弗拉特氏菌培養(yǎng)基 英文名稱： 產品規(guī)格：250g
可溶性淀粉培養(yǎng)基 英文名稱：Soluble Starch Medium 產品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Calcineurin subunit B type 1
化工儀器網