產(chǎn)品名稱

名稱    肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來源：肝動脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肝動脈組織,；在胚胎期，肝臟有3條動脈供血,，分別來源于胃左動脈,、腹腔動脈和腸系膜上動脈，這3條動脈分別的不同部位。出生后,，一般保留一條動脈,，大部分為起源于腹腔動脈的動脈，由其分出左,、右肝動脈供應(yīng)左,、右半肝。偶爾也可見起源于胃左動脈的動脈或起源于腸系膜上動脈的動脈,。但也有2條動脈并存的情況,，如起源于腹腔動脈和起源于胃左動脈（25%），起源于腹腔動脈和起源于腸系臘上動脈（10%）,，而起源于胃左動脈和起源于腸系膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見,。此外，還有5%像胚胎期一樣,，3條動脈同時存在,。這種起源于腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動脈的動脈供血時,，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈,，如果在常見肝動脈類型外，還有一支這種異位起始的動脈的一部分血流,，這種肝動脈稱副肝動脈,。肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞是襯于肝動脈內(nèi)表面的單層扁平上皮，在炎癥時高表達黏附分子,，與血流中白細(xì)胞表面黏附分子相互作用,，從而介導(dǎo)白細(xì)胞穿越血管壁，亦屬一類非專職抗原提呈細(xì)胞,。它們吞噬異物,、細(xì)菌、壞死和衰老的組織,，還參與集體免疫活動,，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓,；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）,；③動脈硬化；④血管生成,；⑤炎癥及腫脹（浮腫）,；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì)，如白血球進出血管,。

5.方法簡介：

實驗室分離的人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-H044

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

產(chǎn)品特點:

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。

2,、 可以處理各種細(xì)菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3,、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時,。

4、 采用溫和的中性裂解組分,，保持蛋白活性,。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。

6、 紫外檢測蛋白濃度時,，背景干擾低,。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等,。

8,、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容,。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

一、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存,，勿作多次解凍,。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性,。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細(xì)胞濃度不要太高,，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后,。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6，依細(xì)胞種類而異,。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml,。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO,，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,，在做冷凍保存之同時,，亦應(yīng)作一個backup culture，以防止冷凍失敗,。

收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒,，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng),。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。