產(chǎn)品名稱

名稱    肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來(lái)源：肝動(dòng)脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肝動(dòng)脈組織；在胚胎期,，肝臟有3條動(dòng)脈供血,，分別來(lái)源于胃左動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈,，這3條動(dòng)脈分別的不同部位,。出生后，一般保留一條動(dòng)脈,，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈,，由其分出左、右肝動(dòng)脈供應(yīng)左,、右半肝,。偶爾也可見(jiàn)起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈。但也有2條動(dòng)脈并存的情況,，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%）,，起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%），而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見(jiàn),。此外,，還有5%像胚胎期一樣，3條動(dòng)脈同時(shí)存在,。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈,，如果肝臟沒(méi)有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí)，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈,，如果在常見(jiàn)肝動(dòng)脈類型外,，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈的一部分血流，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈,。肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是襯于肝動(dòng)脈內(nèi)表面的單層扁平上皮,，在炎癥時(shí)高表達(dá)黏附分子,，與血流中白細(xì)胞表面黏附分子相互作用，從而介導(dǎo)白細(xì)胞穿越血管壁,，亦屬一類非專職抗原提呈細(xì)胞,。它們吞噬異物、細(xì)菌,、壞死和衰老的組織,，還參與集體免疫活動(dòng)，包括：①血管收縮及血管舒張,，從而控制血壓,；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動(dòng)脈硬化,；④血管生成,；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì),，如白血球進(jìn)出血管,。

5.方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H044

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

產(chǎn)品特點(diǎn):

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備,。

2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體,。

3,、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

4,、 采用溫和的中性裂解組分,，保持蛋白活性。

5,、 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定。

6,、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),，背景干擾低。

7,、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶等。

8,、 本試劑盒中不有EDTA,，與金屬螯和層析等兼容。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一,、凍存時(shí)的注意事項(xiàng)：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以5~10 ml 小體積分裝,，4 度避光保存,，勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存,。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性,。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,，細(xì)胞濃度不要太高，某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后,。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,，依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml,。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 ％ DMSO,，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,，在做冷凍保存之同時(shí)，亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,，以防止冷凍失敗,。

收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。