產(chǎn)品名稱

名稱    大鼠腎成纖維細(xì)胞

2.組織來源：腎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠腎成纖維細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子,、鉀離子、碳酸氫鈉等,，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素,、活性維D3、前列腺素,、激肽等,，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能,，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。腎成纖維細(xì)胞是腎臟結(jié)締組織中最重要的細(xì)胞類型,，在體外培養(yǎng)中,，一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等,，為貼壁生長型細(xì)胞,。剛分離的腎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。其主要功能有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分,；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,，進(jìn)而影響腎臟病變,。

5.方法簡介：

實驗室分離的大鼠腎成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

實驗室分離的大鼠腎成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R069

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

產(chǎn)品特點:

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備,。

2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體,。

3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時,。

4,、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性,。

5,、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定,。

6,、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低,。

7,、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等,。

8,、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容,。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

一、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存,，勿作多次解凍,。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存,。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,，細(xì)胞濃度不要太高,，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6，依細(xì)胞種類而異,。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml,。

5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 ％ DMSO,，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時,，亦應(yīng)作一個backup culture,，以防止冷凍失敗。

收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；

3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。