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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠腎實質(zhì)細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0903 |
商品介紹：
名稱 大鼠腎實質(zhì)細胞 2.組織來源：腎組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠腎實質(zhì)細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子、鉀離子,、碳酸氫鈉等,，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素、促紅細胞生成素,、活性素D3,、前列腺素、激肽等,，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進行,。腎臟移植是臨床上治療慢性腎功能衰竭的有效方法，然而這種方法受到供體腎短缺的限制,。腎細胞移植可部分解決供體腎短缺的問題,，是未來可以替代腎臟移植的*方法。因此,，體外腎細胞的培養(yǎng)受到國內(nèi)外有關(guān)專家的密切關(guān)注,。原代腎細胞作為一種常用的腎臟毒理學(xué)研究對象，其分離方法主要有機械研磨分離法和酶消化法,，酶消化法因?qū)毎麚p傷小,、分離效果好而優(yōu)于機械研磨分離法；目前常用的酶消化法主要是胰蛋白酶消化法和膠原酶消化法,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠腎實質(zhì)細胞采用膠原酶-胰蛋白酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠腎實質(zhì)細胞經(jīng)檢測,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R056 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 FGF18 基因全長ORF克隆
小鼠 ARTN 基因全長ORF克隆
小鼠 TNFSF12 基因全長ORF克隆
小鼠 ACVR2B 基因全長ORF克隆
小鼠 HBEGF 基因全長ORF克隆
小鼠 RBP4 基因全長ORF克隆
小鼠 TMEFF2 基因全長ORF克隆
小鼠 GFRA2 基因全長ORF克隆
小鼠 SERPINF2 基因全長ORF克隆
小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆
大鼠腎實質(zhì)細胞氯,、碘中和劑管（帶棉簽） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Protein FAM151A
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ferritin light chain
0.312-20 ng/mL 人基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒
UVM添加劑1（萘啶酮酸4.5mg） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5支
酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD） 英文名稱：Yeast Peptone Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Malate dehydrogenase, mitochondrial
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human C-telopeptide of Collagen alpha-1(II) chain
15.6-1000 pg/mL 人Fc片段免疫球蛋白G (FclgG)ELISA試劑盒
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