名稱    大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞

2.組織來源：視網(wǎng)膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞,、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐、視桿細(xì)胞層,、外界膜,、外顆粒層、外叢狀層,、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層,，專司感光,，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,，而視錐細(xì)胞則在中心凹處最多,。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo),。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能力*。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質(zhì)細(xì)胞,，大約占視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的90%,，因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關(guān)注。在超微結(jié)構(gòu)水平上,，Muller細(xì)胞的胞質(zhì)似乎比臨近的其他細(xì)胞更高的電子密度,，更發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核是典型的卵圓形或多角形,。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,，Muller細(xì)胞形態(tài)也會有所差異的。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞是一種特化的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,，不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能的作用,，并調(diào)制視網(wǎng)膜神經(jīng)元活動，還能參與多種病理過程,，尤其是眼底增殖性病變,，如增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等,，體外培養(yǎng)Muller細(xì)胞是研究這些增殖性病變途徑之一,。

5.方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞采用膠原酶消化法和胰蛋白酶反復(fù)消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R117

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品特點(diǎn):

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。

2,、 可以處理各種細(xì)菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3,、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí),。

4、 采用溫和的中性裂解組分,，保持蛋白活性,。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。

6、 紫外檢測蛋白濃度時(shí),，背景干擾低,。

7,、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等,。

8,、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容,。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一,、凍存時(shí)的注意事項(xiàng)：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存,，勿作多次解凍,。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存,。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,，細(xì)胞濃度不要太高,，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,，依細(xì)胞種類而異,。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml,。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml,。

5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,，在做冷凍保存之同時(shí),，亦應(yīng)作一個(gè)backup culture，以防止冷凍失敗,。

收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒,，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；

3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。