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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0939 |
商品介紹：
名稱 腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源：腎組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖、蛋白質(zhì),、氨基酸、鈉離子,、鉀離子,、碳酸氫鈉等，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素,、活性維D3、前列腺素、激肽等,，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎動(dòng)脈的分支為葉間動(dòng)脈，穿行于腎柱內(nèi),，上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處,，形成與腎表面平行的弓狀動(dòng)脈。小葉間動(dòng)脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管,，并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動(dòng)脈,，進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯集成出球小動(dòng)脈,，出腎小體,。直小動(dòng)脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯合成直小靜脈,，入弓狀靜脈,、葉間靜脈，最后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎,，注入下腔靜脈,。腎動(dòng)脈既是腎的營養(yǎng)血管，又是腎的機(jī)能血管,，與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān),。腎動(dòng)脈在腎實(shí)質(zhì)內(nèi)形成兩個(gè)毛細(xì)血管網(wǎng)：腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較高,，利于血漿濾過形成原尿,；球后毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較低,，利于腎小管的重吸,。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是腎動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用,，②在腎小管的重吸收過程中起重要作用，③保持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H070 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 KRT15 基因全長ORF克隆
大鼠 ERAP1 基因全長ORF克隆
大鼠 MCM7 基因全長ORF克隆
大鼠 METTL1 基因全長ORF克隆
大鼠 NSDHL 基因全長ORF克隆
大鼠 SELENBP1 基因全長ORF克隆
大鼠 STRADA 基因全長ORF克隆
大鼠 TMEM55A 基因全長ORF克隆
大鼠 HADH 基因全長ORF克隆
大鼠 GPD1 基因全長ORF克隆
腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞3.12-200 U/mL 人卵巢癌標(biāo)志物/糖抗原125(CA125)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cardiotrophin-1
62.5-4000 pg/mL 人細(xì)胞角蛋白18(KRT-18)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Cyclic guanosine monophosphate
曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB） 英文名稱：Eosin-Methylene Blue Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Vitamin D3
0.312-20 ng/mL 人核受體亞家族1I成員3 ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白3(C1QTNF3)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人黑皮質(zhì)素受體4(MC4-R)ELISA試劑盒
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