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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠結腸平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0857 |
商品介紹：
名稱 小鼠結腸平滑肌細胞 2.組織來源：結腸組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠結腸平滑肌細胞分離自結腸組織,；結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸,、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層,、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織）,，肌層（內環(huán)形,、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）,。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內環(huán)形,、外縱行平滑肌,；結腸運動少而緩慢,，對刺激的反應也較遲緩。結腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運動和物質分泌,、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內信號轉導途徑等研究中起著重要的作用。結腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結腸平滑肌運動活性受到神經遞質,、胃腸激素和藥物等因素的調節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展，對胃腸運動的研究已從器官,、組織水平發(fā)展到細胞,、分子水平，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理,、藥理和分子生物學等實驗,。體外培養(yǎng)細胞，由于影響因素單一,，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M044 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 CD37 基因全長ORF克隆
小鼠 CD26 / DPP4 基因全長ORF克隆
小鼠 CD24A 基因全長ORF克隆
小鼠 MSI2 基因全長ORF克隆
小鼠 WFDC2 基因全長ORF克隆
小鼠 ERBB2 基因全長ORF克隆
小鼠 PTPRC 基因全長ORF克隆
小鼠 CD33 基因全長ORF克隆
小鼠 CD6 轉錄變體2 基因全長ORF克隆
小鼠 PTK6 基因全長ORF克隆
小鼠結腸平滑肌細胞0.156-10 ng/mL 人SAAL1蛋白(Protein SAAL1)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL 人白介素18(IL-18)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human NAD-dependent deacetylase sirtuin-2
0.312-20 ng/mL 人轉錄因子E2-alpha ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Flotillin-1
0.78-50 uIU/mL ELISA Kit for Tetrahydrobiopterin
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 英文名稱：10% NaCl Trypticase Soy Broth 產品規(guī)格：9ml*20支/包
0.156-10 ng/mL 人白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人Humanin樣蛋白6(HN6)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL 人巖藻糖基轉移6(FUT6)ELISA試劑盒
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