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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1289 |
商品介紹：
名稱 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞 2.組織來源：頜骨組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞分離自頜骨組織,；頜骨,，是指頜部的骨頭，分為上頜骨和下頜骨,。構(gòu)成口腔上下部的骨頭和肌肉組織,，上部叫上頜,，下部叫下頜,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠頜骨成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠頜骨成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R204 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TLR3 / CD283 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PTGS2 / COX2 / PGHS-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PRKD2 / PKD2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TRIB2 / TRB2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 VEGFA / VEGF164 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
RBBP4 / RBAP48 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠頜骨成纖維細(xì)胞溶血磷脂酸?；D(zhuǎn)移β抗體Human immunoglobulin kappa ELISA Kit大鼠高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒,
AFP4b蛋白抗體Human IGBP1 ELISA Kit大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒,
載脂蛋白C2抗體Human IMP3(U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein IMP3) ELISA Kit豚鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒,
載脂蛋白A5抗體Human IMPAD1 ELISA Kit豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體（VE-cad）ELISA試劑盒,
載脂蛋白A2抗體Human IMP4 ELISA Kit鴨病性腸炎?。―EV）ELISA試劑盒,
溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移D抗體Human IGF2BP2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2) ELISA Kit綿羊白介素6（IL-6）ELISA試劑盒,
載脂蛋白E3抗體Human IGF2BP1(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 1) ELISA Kit植物乙酸（IAA） ELISA試劑盒,
ABI基因家族2抗體Human IMP5 ELISA Kit生長釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA試劑盒--動物,，人
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