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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠肝枯否細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1099 |
商品介紹：
名稱 小鼠肝枯否細胞 2.組織來源：肝臟組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠枯否細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接?？莘袷霞毎?/span>(Kupffer細胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細胞,，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細菌,、異物和衰老的紅細胞,，并把血紅蛋白分解成膽紅素。此外,，肝巨噬細胞也有處理抗原,，誘導T細胞增殖，參與免疫調(diào)節(jié)的作用,?？莘袷霞毎鸵话憔奘杉毎煌莘袷霞毎痪哂性黾涌乖庖咴缘哪芰?，相反有消除或減弱抗原性的作用,?？莘袷霞毎芡淌蓙碜匝貉h(huán)的抗原抗體復合物和其他有害物質(zhì)，以消除這些物質(zhì)對機體的損害,?？莘窦毎δ苷系K可導致腸源性內(nèi)毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠肝枯否細胞采用混合酶灌流消化,、低速離心、密度梯度離心,、差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠肝枯否細胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M132 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、巨噬細胞 傳代特性屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
FGFR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
ApoE 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PLAU / UPA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
AKT1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EphB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EphB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
MMP-14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
APP / PN2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD26 / DPP-IV 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠肝枯否細胞0.156-10 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員2B(WNT2B)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 英文名稱：Sabouraud’s Glucose Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 鹿特定基因序列(Deer)核酸檢測試劑盒
7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Uncharacterized protein KIAA1377
PALCAM肉湯 英文名稱：PALCAM Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA) 英文名稱：Potato Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
WLD培養(yǎng)基 英文名稱：WLD Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
78-5000 pg/ml ELISA Kit for Human Stromelysin-2
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human DNA replication factor Cdt1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Adipocyte plasma membrane-associated protein
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