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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 35.1（雜交瘤細胞抗CD2) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0645 |
商品介紹：
名稱 35.1（雜交瘤細胞抗CD2) 種屬小鼠(B細胞),，小鼠（骨髓瘤細胞） 年齡（性別）不詳 組織來源未知 生長特性懸浮細胞 細胞形態(tài)淋巴母細胞樣 背景描述動物用佛波醇肉豆寇酸(PMA)活化的人T淋巴細胞免疫。 脾細胞與gp2/O-Agl4骨髓瘤細胞融合,。 抗體與人T細胞表面蛋白Tp50(CD2)反應,。 抗體抑制T細胞增殖反應和細胞毒反應,，但不抑制抗體倡導的細胞毒反應,。 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2,，5% 注意事項該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液,；請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液,。 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
TNFAIP3 基因全長ORF克隆
MMP13 基因全長ORF克隆
EFNA4 基因全長ORF克隆
RGMA 基因全長ORF克隆
NEDD9 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
CAT 基因全長ORF克隆
BCL6 基因全長ORF克隆
PTX3 基因全長ORF克隆
PAH 基因全長ORF克隆
PPARA 基因全長ORF克隆
35.1（雜交瘤細胞抗CD2)0.156-10 ng/mL 人核苷二還原亞基M2(RIR2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人周期蛋白依賴性激激活劑1 ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人受體應答蛋白2(RARRES2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人肌球蛋白調(diào)節(jié)輕多肽9(MYL9)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Serotransferrin
B用培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 13
0.47-30 nmol/L ELISA Kit for Human Lysyl oxidase homolog 3
孟加拉紅培養(yǎng)基顆粒 英文名稱：Rose Bengal Medium 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋*10
78-5000 pg/mL 人高親和力γ免疫球蛋白FC段受體I(IgG Fc receptor I)ELISA試劑盒
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