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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-24 14:35:19瀏覽次數(shù)：293
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X1421 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠胚胎干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1421 |
商品介紹：
名稱 大鼠胚胎干細(xì)胞 2.組織來源：囊胚 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell,，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞,，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性,。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說,，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞,。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官,，包括生殖細(xì)胞,。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大,，有一個或幾個核仁,，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少,，結(jié)構(gòu)簡單,。體外培養(yǎng)時，細(xì)胞排列緊密,，呈集落狀生長,。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色,，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色,。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴,。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀,。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米,，豬、牛,、羊ES細(xì)胞的顏色較深,，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別,，有其特定的生長特性和特定的標(biāo)志,，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60,、TRA-1-81等標(biāo)志,，這些特性和標(biāo)志均可以用于對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外,，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時,，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性,。另外,，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低,。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長的原因,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織,，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),，胰酶消化傳代純化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含LIF、BMP,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R320 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)短梭形,、多角形 傳代特性可傳5-8代左右 消化液0.025%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
XPNPEP2 / X-Pro aminopeptidase 2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IGFBP6 / IBP-6 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IGFBP6 / IBP-6 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PRSS27 / Pancreasin / Marapsin 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD4 / LEU3 (aa 1-208) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
RSPO3 / R-spondin 3 (aa 1-146) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
FGFR4 / FGF Receptor 4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL12A & IL12B Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
FLT1 / VEGFR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SerpinA6 / CBG 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠胚胎干細(xì)胞ATPIF1蛋白抗體Human LEFTY2 ELISA Kit小鼠腦紅蛋白（NGB）ELISA試劑盒,
Attractin蛋白抗體Human LEF1 ELISA Kit小鼠α2抗纖溶（α2-AP）ELISA試劑盒,
化有絲分裂激B抗體Human LCTL ELISA Kit白活化黏附因子（ALCAM）ELISA試劑盒--動物,，人
肌動蛋白相關(guān)蛋白M1抗體Human LDB1 ELISA KitⅠ型膠原N末端肽（NTX）ELISA試劑盒--動物，人
ALKB蛋白抗體Human LDB3 ELISA Kit包蟲抗體IgG ELISA試劑盒--動物,，人
乙酰輔A?；D(zhuǎn)移1抗體Human LDHAL6A ELISA Kit降鈣素原（PCT）ELISA試劑盒--動物，人
化β-肌動蛋白抗體Human LAX1 ELISA Kit促甲狀腺素釋放（TRH）ELISA試劑盒--動物,，人
化素能受體β2/β2-AR 抗體Human LATS2 ELISA Kit兔血栓素B2（TXB2）ELISA試劑盒,
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