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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠角膜內(nèi)皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1223 |
商品介紹：
名稱 小鼠角膜內(nèi)皮細胞 2.組織來源：眼角膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠角膜內(nèi)皮細胞分離自眼角膜組織,；角膜位于眼球前壁的一層透明膜,，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形,，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,，中央部最薄,。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜,，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛,。為了保持透明，角膜并沒有血管,，透過外界空氣,、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層,，由前向后依次為：上皮細胞層,、前彈力層、基質(zhì)層,、后彈力層,、內(nèi)皮細胞層,。角膜的高度透明性和光學性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一,，而角膜內(nèi)皮細胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細胞是角膜內(nèi)層的單層細胞,，構成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分,，維持角膜的半脫水狀態(tài),，保證角膜的正常厚度和透明度,。一旦角膜內(nèi)皮細胞功能出現(xiàn)紊亂，常導致角膜水腫而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜內(nèi)皮細胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細胞對角膜透明性有重要作用,；③角膜內(nèi)皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性,，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度,，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài),，維持透明性。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠角膜內(nèi)皮細胞采用混合膠原酶消化結合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠角膜內(nèi)皮細胞經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M179 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
KLK13 / Kallikrein 13 ELISA配對抗體
PIGR ELISA配對抗體
PDGFRA / CD140a ELISA配對抗體
IL3RA / CD123 ELISA配對抗體
CTLA4 / CD152 ELISA配對抗體
MSR1 / CD204 ELISA配對抗體
小鼠 CD14 ELISA配對抗體
甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對抗體
SerpinG1 / C1 inhibitor / C1IN ELISA配對抗體
METTL1 ELISA配對抗體
小鼠角膜內(nèi)皮細胞大腦蛋白2抗體Human GPX8 ELISA Kit小鼠抗利尿/血管/精（ADH/VP/AVP）ELISA試劑盒,
程序性死亡配體1抗體Human GRAMD1B ELISA Kit小鼠吡交聯(lián)物（PY）ELISA試劑盒,
B7-H4抗體Human GRAMD4 ELISA Kit大鼠己糖激（HK）ELISA試劑盒,
β分泌抗體Human GRB7 ELISA Kit大鼠血小板反應蛋白/敏感蛋白1（TSP-1）ELISA試劑盒,
相關死亡促進因子Bad抗體Human GRHPR(Glyoxylate Reductase/Hydroxypyruvate Reductase) ELISA Kit豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子（MMSAM）ELISA試劑盒,
BaxHuman GRID1 ELISA Kit雞一氧化氮（NO）ELISA試劑盒,
程序性死亡配體2抗體Human GPS2 ELISA Kit猴白介素4（IL-4）ELISA試劑盒,
膽汁酸鹽輸出泵/ATP結合盒轉(zhuǎn)運蛋白11抗體Human GPSM2 ELISA Kit猴載脂蛋白A1（apo-A1）ELISA試劑盒,
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