名稱    大鼠肺小動脈平滑肌細胞

2.組織來源：肺小動脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠肺小動脈平滑肌細胞分離自肺小動脈組織,；小動脈（smallartery）,，管徑在0.3～1mm之間，小動脈包括粗細不等的幾級分支,，也屬肌性動脈,。較大的小動脈,，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌,，外膜厚度與中膜相近,，一般沒有外彈性膜。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素,，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)",。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2,。中膜的肌層相對比其他動脈為厚,，當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時,，其管腔可以*閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細血管內(nèi),，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力,。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升,。反之,，當(dāng)小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細血管,，外周阻力明顯下降,，血壓降低。終末小動脈（terminal arteri-ole）的口徑為20～30μm,；后小動脈（metar-teriole）,，又稱毛細血管前小動脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12～15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌,，在毛細血管前小動脈分支的起始部分,，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細血管前括約?。?/span>precapillary sphinc-ter）,，其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細血管的血流量,，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)",。

5.方法簡介：

實驗室分離的大鼠肺小動脈平滑肌細胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

實驗室分離的大鼠肺小動脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R321

換液頻率每2-3天換液一次,；

生長特性貼壁

細胞形態(tài)成纖維細胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品特點:

1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備,。

2,、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體,。

3,、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

4,、 采用溫和的中性裂解組分,，保持蛋白活性。

5,、 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定。

6,、 紫外檢測蛋白濃度時,，背景干擾低。

7,、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶等。

8,、 本試劑盒中不有EDTA,，與金屬螯和層析等兼容。

細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一,、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),，例如是否有雜細胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級，以5~10 ml 小體積分裝,，4 度避光保存,，勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲存后對細胞會有毒性,。

4. 冷凍保存的細胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細胞濃度不要太高,，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后,。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,，依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml,。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO,，若是不確定細胞之冷凍條件,，在做冷凍保存之同時，亦應(yīng)作一個backup culture,，以防止冷凍失敗,。

收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒，拆下封口膜,，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 待細胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng),。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。